• Santé - Biochimie, Extraction, Protéines

[Biochimie] extraction et dosage de proteines (leucocytes)

SVP 1) je veux savoir la composition de la solution de lyse pour extraire les proteines à partir de leucocytes.  [...] j'ai doser les proteines par la methode de bradford mais j'ai trouvé des valeurs négatives.  [...]

[Biochimie] extraction protéines, WB elastine murine

[Biochimie] extraction protéines, WB elastine murine.  [...] Je souhaite réaliser un Western-Blot afin de détecter l'élastine de souris. Sachant que l'élastine est une protéine insoluble, je recherche un protocole d'extraction de protéines à partir de tissus pulmonaires de souris qui me permettrait d'obtenir un maximum d'élastine soluble afin de faciliter sa détection par Western-Blot. Je vous remercie par avance de vos conseils.  [...]

[Biochimie] extraction protéines membranaires à partir de tissu cérébral congelé (pour étude de co-IPP)

100% d'accord. Après comme tu le dis, délicat dosage extraction - solubilisation - protection. Tu devrais essayer sur des échantillons qui ne sont pas précieux à quelle limite de détergent tu arrives à solubiser ton récepteur.  [...] J'ai trouvé ce détergent. N-dodecyl-ß-D-maltoside, savez-vous s'il conserve les interactions entre deux prot membranaires (récepteur canal + protéine régulatrice) Car j'ai malheureusement lu que le CHAPS casse les interactions entre les protéines membranaires, donc ce n'est pas bon pour moi ( Useful for solubilizing membrane proteins and breaking protein-protein interactions ).  [...]

[Biochimie] Extraction proteine nucleaire nematode

Si c'est un facteur de transcription tu as différentes solution, soit tu fais un ChIP mais il te faut un anticorps contre ta protéine d'intérêt.  [...] Sinon tu peux taggé ta proteine mais ca va te prendre du temps, si tu as la séquence tu fais un histidine tag ou une fusion avec la gst et tu isole sur colonne d'affinité. Mais pour ca va falloir faire des constructions, les microinjecter, et avoir des vers transgéniques.  [...]

[Biochimie] Trypsine ou Pronase

J'ai un TP de biochimie à faire où on doit purifier de l'ADN et à une certaine étape, on ajoute de la pronase à l'ADN pour briser les peptides en solution. Par la suite, on fait une extraction au phénol/chloroforme pour enlever les protéines et lipides de la solution contenant l'ADN. Alors, j'aimerais savoir.  [...] 1. Si on utilise de la trypsine au lieu de le pronase, cela fait en sorte que les protéines sont hydrolysées en de moins petits fragments. Ma question est. quel impact le fait d'avoir des fragments de protéine plus gros a sur le reste de la purification Est-ce que l'extraction au phénol/chloroforme sera moins efficace Si oui pourquoi.  [...]

[Biochimie] Extraction protéine de cerveau pour IP

je souhaiterai faire une IP d'une protéine en fusion avec MBP et des extraits protéiques de cerveau de souris.  [...] Je souhaiterai savoir si vous auriez un protocole d'extraction de protéines à partir de cerveau.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

Je suis en stage pour le M1. On travaille sur l'hypophyse de rat et on a fait une technique d'extractin d'ARN et de proteines au trizol. Ensuite les proteines sont mises dans du SDS et stockés à moins 20°C. Sauf que quand on a fait un dosage proteique par la methode de lowry d'où on a obtenu des quantités trés faibles de proteine.  [...] $récupérer les protéines apres extraction aux solvants organiques n'est pas le mieux. Je sais que l'hypophyse n'est pas énorme, mais l'idéal est d'extraire les ARN et protéines séparément.  [...]

Méthodes d'extraction et de purification des protéines recombinées

On dit protéine recombinante. Tu auras plus de réponses sur le forum biologie. En attendant. http.//fr.wikipedia.org/wiki/Purification_de_protéines.  [...] tu as deu méthodes d'extractions. non dénaturante (qui permet de maintenir l'activité de l'enzyme), dénaturante (si tu n'as pas besoin de conserver l'activité de la protéine).  [...]

[Biochimie] Extraction d'un extrain protéique embryonnaire

1. J'aurais extraire les protéines embryonnaires de Zebrafish (des petits poissons). Mon problème se pose au niveau de l'extraction pas au niveau de la récupération des embryons. Je ne sais pas si je dosi les conserver dans la glace, dans l'azote ou à RT.  [...] 2. Ma deuxième question concerne la conservation des protéines, je ne sais pas si je dois les garder dans un tampon (buffer) ou si mon extrait de protéine resterait stable à 4°C dans l'eau. Je ne sais pas non plus si le plus simple est de hyophiliser l'extrait et de le garder en poudre.  [...]

[Biochimie] Extraction protéine cry du bacillus thuringiensis

J'ai une présentation à réaliser sur l'extraction de la protéine cry (insecticide) du bacillus thuringiensis. Uniquement l'extraction et non la culture et la purification. Le problème est qu'il existe énormément de méthodes liées à l'extraction de cette protéine, et je m'y perd donc un peu.  [...] La méthode que je choisirais pour une telle isolation serait une destruction physique (Homogénéisateur de type Dounce, presse Aminco- French...) suivie d'une sédimentation pour séparer les composants. Ces méthodes conviennent-elles à mon problème De plus, avez vous une idée du tampon à utiliser pour réaliser cette extraction (SDS ).  [...]