• Santé - Banque, ADN, Bactéries

[Biochimie] banque d'ADN

comment fait on une banque d'ADN à partir de phage alors que ceux ci lysent la bactérie pourtant n'est ce pas les bactéries recombinantes qui forment la banque.  [...] Le phage lambda sert de vecteur. Ils portent l'ADN recombinant, vont infectés les bactéries hôtes et se multiplier. Cela permet de constituer une banque de phages clonés.  [...]

Obtention d'anticorps

* Par phage-display = une banque d'ADN (plusieurs millions de séquences codants pour des anticorps tous différents) est transfectée dans des phages, de telle sorte que ceux-ci présentent (=display) les anticorps sur leur capside. On infecte cette banque de phage dans des bactéries (1 bactérie = 1 phage), on induit la formation de phages dans ces bactéries, puis on les teste tous, par FACS ou par ELISA.  [...] Comme les gens qui ont inventé la techniques sont malins, ils ont fait en sorte que si on prend les mêmes phages et qu'on les infecte dans d'autres bactéries, alors celles ci ne produisent plus des phages en masse couplés à l'anticorps... Mais des anticorps solubles, adressé dans le périplasme.  [...]

[Génétique] Les introns en génie génétique

j'ai donc restreint l'ADN, l'ai placé dans des bactéries à l'aide de vecteurs d'ADN (j'ai créé une banque génomique pour faire simple).  [...] Eh bien on utilise un cDNA et pas une banque d'ADNg. Le cDNA proviens d'une transcription inverse de l'ARNm (qui a donc été débarassé des introns). Par contre faire exprimer un gène codant une protéine de venin de serpent chez une bactérie, à quasiment aucune chance de donner une protéine active au final.  [...]

[Biotechnologie] Problèmes sur les notions/calculs de plasmide

Il choisit de faire pousser un certain nombre de colonoes bactériennes sélectionnées afin d'amplifier son plasmide et ainsi disposer d'une grosse quantité de son insert NIACUSE pour le séquencer et vérifier son intégrité. Il récolte les plasmides après lyse alcaline des bactéries et extraction de l'ADN au phénol/chloroforme.  [...] Donc, ici, j'obtiens 14842 pb pour plasmide + insert de la banque ADN génomique et 13361 pb pour plasmide + insert de la banque d'ADNc. Ce qui change mon résultat de la taille de l'insert génomique comparé à ton calcul.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

Beh, tu introduis dans des bactéries pour obtenir une quantité de plasmides élevée et puis tu extraies cet ADN. Mais le truc est que ta banque n'est pas les cellules, ta banque est toutes les copies des fragments d'intérêt que tu souhaites (représenté chacun une 10aine de fois, je crois, pour être certain que tout le génome est couvert).  [...] La mise en place de cette technique nécessite l'obtention d'ADNc simple brin. Pour cela, nous transformerons des bactéries compétentes avec notre banque d'ADNc. Ensuite, nous surinfecterons ces bactéries par le phage à ADN simple brin M13K07. Nos plasmides d'ADNc contiennent l'origine de réplication de ce phage, donc, quand il se répliquera (en ADN simple brin) nos plasmides d'ADNc seront eux aussi répliqués en ADN simples brins.  [...]

[Biotechnologie] Concrètement c'est quoi une banque d'ADN

Par exemple, une boite de pétrie, dans laquelle il y a des souches bactériennes ayant incorporées des séquences d'intérêts, peut elle être qualifié de banque d'ADN.  [...] L'utilisation du vecteur Bac (bacterial artifical chromosome) qui permet d'integrer un graaand bout de génôme. Son petit truc en plus Elle possède le gène par permettant la bonne division de la bacterie dans deux cellules filles.  [...]

[Biochimie] Question sur la biotechnologie

En bio moléculaire, on parle de clones souvent pour parler de gènes. En gros on a un gène lambda, on l'insère dans un vecteur (grosso modo un ADN avec des gènes de machinerie d'expression ) et ensuite on insère ledit vecteur dans une bactérie pour faire multiplier le gène, par les divisions cellulaires successives, les cellules bactériennes issues de la même cellule mère étant sur le papier, identiques.  [...] Dans une banque tu as de nombreux clones différents. Ceux identiques sont ceux qui forment une colonie (=un clone) sur ta boîte (car il faut des millions de bactéries pour former quelque chose de visible à l'oeil nu). Sur une boîte de Petri tu peux avoir des centaines de colonies qui correspondent à un fragment d'ADN unique au sein de la banque.  [...]

[Identification] Bacterial display !

Donc dans notre banque peptidique,on met quoi au juste. les Lig A (donc les bactéries) ou les peptides qu'on cherche à séléctionner.  [...] Dans le cas de l'article, on a que des bactéries exprimant le ligA ou pas (comme témoin) donc c'est plus les peptides à tester qui constituent une banque à screener.  [...]

Technique de séquençage de génome (WGS)

Mettons qu'on prenne une bactérie quelconque, on récupère son ADN, on le fragmente par sonication pour avoir des fragments chevauchant, et on les intègre dans des plasmides. Ensuite on constitue notre banque de clonage.  [...] On doit ensuite séquencer pour chaque puits l'insert du plasmide (pour ensuite tenter de former les contigs, et reconstituer le génome complet). Notre prof nous a dit que séquencer les extrémités de l'insert suffit en général (et qu'on séquence le milieu qu'en cas de lacune par exemple).   [...]

Random priming

En cours, notre prof nous a présenté ça comme étant une technique de sélection par hybridation de gènes d'intérêts à partir d'une banque d'ADN (par exemple).  [...] Est-ce que les techniques de random priming peuvent ou non être utilisées à des fins de sélection d'un gène d'intérêt à partir d'une banque d'ADN génomique (en pratique j'entends, car n'étant pas encore dans le milieu de la recherche, je ne sais pas quelles techniques sont les plus utilisées et pour quoi parmi toutes celles vues en cours).  [...]