• Santé - Bandes, SPE, Membrane

[Biologie Moléculaire] Bandes non spécifiques en Western blot

Les deux anticorps reconnaissent des protéines différentes, les anticorps secondaires sont différents et pourtant sur chacun de mes gels j'ai des bandes apparemment non spécifique (à 60kDa environ) et exactement identiques d'une membrane à l'autre.  [...] Pour ce qui est du stripping il n'y en a pas eu puisque je n'ai fais qu'un Ac primaire par membrane. Ce qui me surprenait c'était d'avoir les même bandes non spé avec des Ac primaire et secondaire complétement différent pour chaque membrane.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment savoir qu'un ARNm est entier ?

Alors effectivement sur mon western j'ai fait migrer un extrait membranaire de rein et en parallèle un extrait membranaire d'une lignée cellulaire exprimant de façon endogène ma protéine. Les bandes surnuméraires que j'observe dans la lignée sont également présentes dans le rein. C'est effectivement peut être du non spé.  [...] Toutes les bandes risquent de ne pas suivre le même profil, certaines bandes risquent même d'être stimulées par le siRNA spécifique de ta protéine... En plus de ça, si les autres bandes suivent le même profil d'extinction que la bande à 100 kDa, cela n'apportera aucune preuve d'isoformes.  [...]

[Biochimie] Western blot en pointillés

Les bandes aspécifiques sont normales mais la bande qui correspond à la prot d'intérêt (RPN2, 63kD) sort en gros pointillés. Je n'ai jamais vu ça et je sèche un peu pour aider mon étudiante sur ce coup. Tous ces autres blots sont nickels ce qui me fait éliminer pas mal d'hypothèses genre buffer, pb de transfert.  [...] N'aurait elle pas trop charge de son echantillon Generalement quand je depose trop, mes bandes non spe sont normales et ma bande spe est en negatif (genre repulsion de l'Ac) et sort blanche sur fond noir.  [...]

Questions sur la biologie

2ème groupe. cyanure poison des complexes de transfert d'électrons dans la mitochondrie (le III ou le iV). A partir de là les déductions vont de soi.   [...] Le cyanure bloque la chaine d'oxydo-réduction (chaine respiratoire) sur la membrane interne des mitochondries, ce qui empêche la respiration et donc la production d'ATP... C'est peut être pas complet masi c'était le sujet de mon DS de spé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Binding tests sur enzyme

Sinon connaissez-vous un autre test de binding si possible relativement peu coûteux et permettant de travailler avec un grand nombre de molécule sur une.   [...] Un test de binding sur cellule entière ou sur membrane isolée, c'est des étapes et des étapes (lavage, fixation...), des soucis de reproductibilité avec des lots de cellules qui vont produire plus ou moins de protéines, des soucis de sensibilité avec beaucoup de non-spé lié a l'absorption des molécules aux membranes.  [...]

Cetacés et écotourisme

Nous sommes un groupe de 9 étudiants en cours de formation d'ingénieur agronome à l'ENSAR (Ecole Nationale Supérieure d'Agronomie de Rennes). Dans le cadre de notre cursus, nous devons réaliser un projet scientifique alliant des aspects à la fois environnementaux, économiques, sociologiques.   [...] Les spécialités envisagées sont assez variées (zootechnie, stats...) mais la plupart des membres de l'association se destinent effectivement à la spé halieutique ou génie de l'environnement.  [...]

la bonne Température d'anneling, PCR microsatellites

- pour une PCR avec Ta. Tm, les amorces lorsqu'elles se fixent (car Température où il y a + de brins qui tendent à être monocaténaires que bicaténaires), s'hybrident avec + de spécificité, en particulier avec leur site spécifique de fixation de l'ADN-. du coup, plus de spécificité mais moins de rendement.   [...] donc moins de rendement pour une PCR à Ta=56°C mais au moins, la bonne bande amplifiée, et de l'amplif non spé à Ta=52°C même si le rendement est pas trop mal.  [...]

princeps et médicaments génériques

- génériques de composition et forme semblables à la spé de réf. (identiques à la spé mais produits dans des labos différents).  [...] - génériques essentiellements similaires à la spé de réf. (même forme pharmaceutique que la spé mais excipients différents).  [...]

Saturation BSA pour purif de protéine His-tagged

PS. J'ai demandé dans mon labo d'autres façon de procéder pour saturer des sites non spécifique (je me suis pas étalé sur le sujet) et on me parle de lait écrémé à 5%. As tu déjà essayé.   [...] Disons que c'est un problème qui dérange personne à part moi, vu que sur le papier on coupera cette bande non spé. Mais étant d'un naturel perfectionniste et n'acceptant pas l'approche du on sait pas ce que c'est mais c'est pas grâve ca se verra pas, je tente autre chose pour essayer d'éliminer ce problème.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR avec augmentation de la T°C d'hybridation?

Blaster des amorces avant une PCR c'est primordial. Surtout lorsque tu cherches à amplifier un membre d'une famille, donc où il y a de fortes chances d'homologies et de conservation de domaines entiers sur les ARNm en question.. Ca aurait été plus facile si tu faisais une qPCR, car avec le syBRGreen, on peut accéder à la spécificité des amorces avec des courbes Intensité = f (Température).  [...] Je ne suis pas si certain que cela que tes bandes sont aspécifiques. Ce ne sont pas celles que tu attends, mais ça n'est peut être pas du bruit de fond, juste que tes oligos amplifient plusieurs choses au détriment de la bande que tu escompte. Surtout si les bandes sont bien nettes et intenses.  [...]