• Santé - Bactéries, Plasmide, Séquence

[Biotechnologie] Fabrication d'une protéine d'intérêt ?

Il y a une autre voie intermédiaire qui est de chercher si il n'existe pas la séquence que l'on cherche dans des banques de plasmides. Là c'est beaucoup moins cher, un peu moins de 100€ le vecteur.  [...] Un vecteur d'expression est un plasmide (un morceau d'ADN spécifique des bactéries) circulaire qui a été trafiqué dans sa séquence pour être utilisé pour exprimer des protéines. En gros, on utilise habituellement des enzymes de restriction pour couper l'ADN et introduire de l'ADN, ce plasmide en contient beaucoup, positionner après un site qui induira la trancription du fragment ajouté en ARN.  [...]

[Biologie Cellulaire] Vecteur d'expression transitoire

Oui il y a expression de ton plasmide sans séquence Ori car cette séquence est nécessaire pour la réplication du plasmide et c'est une origine de réplication procaryote lorsqu'on fait des expressions transitoires car on produit les plasmides chez E. coli. Pour initier la transcription on utilise la plupart du temps le promoteur fort du cytomégalovirus (CMV) que l'on place en amont de la séquence codante.  [...] Et dernière chose, pour la production des plasmides dans des bactéries, il ne faut pas qu'une origine de réplication procaryote (Ori) mais aussi des séquence codant un ou plusieurs gènes de résistance à des antibiotiques (habituellement 2) pour sélectionner les bactéries qui ont intégré le plasmide dans un milieu de culture contenant les antibiotiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Identification d'un gène déterminé

Quelles autres méthodes seraient envisageables pour vérifier si une séquence précise se trouve dans une ADN. Reprenons mon exemple plutôt, quelles méthodes existent-ils pour identifier le gène bla dans une ADN bactérienne (situé dans un plasmide ou dans son patrimoine génétique, peut importe).  [...] J'ai une bactéries ayant un plasmide contenant une résistance aux béta-lactasame. Le gène de cette résistance est le gène bla. Je connais donc sa séquence. Et je voudrai vérifier sur des bactéries (E.coli U12 HB101), porteuses de cette résistance, si ce gène peut être transporté/ incorporé du plasmide dans leur le patrimoine génétique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Colonies de bactéries

Je suis actuellement entrain d'effectuer une modification de BAC par recombinaison homologue dans la bactérie DH10B. Je viens de transformer mes bactéries qui contiennent le BAC avec le plasmide contenant la séquence que je veux insérer dans ce BAC. Après l'electroporation, mes bactéries ont poussées sur un milieu contenant des antibiotiques appropriés montrant que certaines ont bien intégrer le plasmide et que celui ci a du s'intégrer dans le BAC (le plasmide contient une origine de réplication qui ne lui permet pas de se répliquer de façon autonome dans ce type de bactéries).  [...] Es tu sur que ton BAC est en seul exemplaire dans la bacterie C'est un probleme courant lors de la mutagenese de plasmide multicopie. Une seule copie va integrer l'ADN qui tu as electropore, du coup resultat positif en PCR mais un mix de pas mal de chose (plasmide vide vs modifie).  [...]

Problème de rendement kit Maxiprep

Comment la séquence de mon insert peut-elle jouer sur la quantité de plasmide présente dans mes bactéries (j'ai conscience que plus l'insert est gros, plus la réplication est lente, mais encore D'autres paramètres influencent-ils la réplication ).  [...] bien souvent quand ca arrive, on observe plutot un auto-empoisonnement et donc elles ne se reproduisent pas, donc vu que tes bactéries se développent il n'ya pas auto-empoisonnement, mais on sait jamais, si c'est une protéine qui joue sur la régulation des plasmides ou sur les séquences génétiques (sans toucher au chromosome et donc a la viabilité) peut etre que ta protéine est la cause.  [...]

[Microbiologie] bacterie resistantes

je dois cultiver des bactéries possédant un plasmide de résistance à un antibiotique. Dans le bouillon, je dois mettre cet antibiotique. Je ne comprends pas pourquoi puisque les bactéries sont résistantes Pouvez m'éclairer.  [...] - Lorsqu'on insère un plasmide dans des bactéries, certaines bactéries du lot n'insèrent pas le plasmide et restent donc non résistantes.  [...]

[Biotechnologie] Plasmide recombinant

5) Pour les bactéries, on peut ajouter une séquence Flag ou etiquette dans le plasmide afin de permettre une extraction plus facile de la protéine, on peut également ajouter un gène (Ompa) permettant l'excrétion dans le périplasme.  [...] 7) Lors de l'utilisation d'agrobacterium tuméfaciens, on crée un plasmide contenant un gène de résistance pour E.Coli et pour la plante, une origine de réplication E.Coli, une origine pour Agrobacterium, et puis deux séquence front gauche et front droit dans lequel on retrouve le gène d'intérêt ainsi qu'un gène de sélection pour la plante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence du promoteur du gène résistance à l'ampicilline

J'ai la séquence complète du plasmide, mais je ne sais pas quelle est la séquence du promoteur bla (oui c'est celui-ci qui m'intéresse). Je sais juste où débute le codon start du gène bla.  [...] Vous avez la séquence du plasmide. J'imagine que sur la carte vous devez avoir les limites de votre cassette ampi (promoteur et séquence codante). Y a qu'a compter pour trouver la séquence de votre promoteur sur votre plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] souris sv129

je souhaiterai savoir si les cellules de souris sv129 possedent l'antigene t de sv40 j'ai en effet vu lors de mon stage qu'il était possible de transfecter des.   [...] cellules eucaryotes avec un plasmide bacterien qui comporte le sequence sv40 ORI. jignorait jusque là qu un plasmide pouvait s'exprimer dans des cellules eucaryotes. je me demandais donc si c'etait pour cette raison (pour pouvoir faire des transfections)que les souris utilisées étaient issues de croisement entre souris sv129 et B6.  [...]

[Génétique] Question qui me tracasse beaucoup ( information génétique )

Quand on parle d'ADN recombinant, c'est en gros quand on mets une séquence, en l'occurrence un allèle qui nous intéresse ( yeux rouges par exemple ), d'un ADN étranger dans le plasmide d'une bactérie par exemple.  [...] C'est vrai que si tu ouvre un plasmide pour le refermer ca ne sert à rien. Quand on ne fait ca ce n'est que le gène qui va par la suite pouvoir être multiplié de facon exponentielle (division cellulaire) par des bactéries qui nous intéresse.  [...]