• Santé - Bactéries, Plasmide, Sauvage

[Biochimie] Mecanisme de ligation SOS clonage

Pour commencer, je pense pas qu'il sagit de la ligase car a chaque ligation jeffectue un controle ligase. j'utilise le vecteur simplement digéré auquel j 'ajoute la ligase pour controler la qualité de la ligase car le plasmide simplement digéré se ferme facilement avec la ligase et si aprés transformation je trouve des colonie qui poussent sur le milieu additionné d antibiotique c'est que la ligase est OK et c'est mon cas.  [...] Je vais suivre vos conseils et faire la transfo a 30seconces mais j sais pas si 2 min à 42°C tue vraiment les bactéries car le controle compétence (cellules compétente plus 1 ul de plasmide sauvage) est impeccable.  [...]

géne sauvage

dans une question en génie génétique j'ai trouvé la phrase suivante.quelles propriétés doit avoir le milieu qui permet la sélection de bactéries renfermant un plasmide possédant un gène lys A sauvage.  [...] On parle parfois d'allèle sauvage pour désigner l'allèle le plus répandu, par opposition à l'allèle mutant qui désigne un allèle rare auquel on s'intéresse. En anglais on parle de wild type. Je pense que cette terminologie vient du temps où on provoquait des mutations chez des drosophiles, et donc l'allèle sauvage était celui que portaient les mouches sauvages qu'on pouvait capturer en-dehors du labo (mais je m'avance peut-être là).  [...]

Génétique et levures

Comme le gène ura n'est pas entièrement délété (contrairement à leu2) le plasmide s'incorpore au chormosome portant ura3. Je croise ce mutant avec le plasmide à la souche sauvage (phase diploide avec meiose).  [...] Lorsque le plasmide s'incorpore au locus ura3 il incorpore aussi leu + on a donc un chromosome ura+ leu+ et un chromosome leu-, à ce stade il y a diploidie pour le gène leu. Le croisement avec le sauvage (qui contient 1 chromosome ura+ et un chromosome leu+) donnera un diploide qui après méiose donnera les spores.  [...]

[Biologie Moléculaire] molécule CD9!!!

Je passe un peu les détails mais un gène (fraction de l'ADN) va donner plusieurs ARN qui vont donner chacune une protéine à chaque fois. Ils intervient pendant la vie cellulaire et sont activés en fonction du type cellulaire et des conditions environnementales précises.   [...] Je ne comprends pas trop pourquoi faire une restauration de l'expression de CD9 avec des ARNm, qui sont instables, plutôt qu'en transfectant un plasmide codant CD9 sauvage.  [...]

[Biotechnologie] Bloquer l'expression d'un gène chez la levure

Tu transfectes tes levures avec un plasmide portant la séquence de ton gène flanquée en amont par le promoteur inductif du gène lacz.  [...] Sinon y'a encore un truc qui me vient à l'esprit mais je ne suis pas certain que ce soit très rigoureux. tu n'inactive pas le gène endogène mais tu transfectes avec un plasmide surexprimant à fond le gène muté. La protéine mutée va rentrer en compétition avec la protéine sauvage et même si le gène sauvage est toujours actif tu va avoir de l'inhibition à cause de la grosse quantité de protéine mutée... Mais après ca dépend aussi du gène.  [...]

[Génétique] mutagénèse

Tu fais une réplique Càd que tu as 5000 clones qui poussent sur énostérol, mais il t'en faut précisément ceux qui sont capable de métaboliser le lanostérol pour produire de l'éno, grâce à un gène fonctionnel introduit avec le plasmide (je te laisse trouver l'expression qui correspond à ça, laquelle est la réponse à la question ci-dessus ).  [...] C'est bien d'avoir 5000 clones, mais comment savoir lesquels parmi eux métabolisent le lanostérol précisément grâce au plasmide, et non pas à cause d'une mutation ponctuelle, une mutation suppresseur ou que sais-je encore En faisant une réplique sur milieu min + lano, tu peux retourner à ta boîte de 5000 et savoir lesquels précisément de tes 5000 clones métabolisent le lano grâce à la copie sauvage portée par le plasmide.  [...]

[Génétique] Experience temoin gene delete

Pour me constituer un temoin, mon tuteur de stage m'a demande d'apporter via un plasmide le gene de la proteine etudiee dans la souche deletee (et donc normalement retablir le phenotype sauvage. Et ainsi s'assurer que la difference observee entre ces deux souches est bien due a la deletion de la proteine et non pas a un effet que pourrait avoir le fait d'enlever simplement le gene (pour exemple deregler un autre gene).  [...] Et c'est ce point qui me pause probleme, pouvez vous me donner un exemple Je ne sais pas si je suis assez claire Grosso modo est ce vraiment un temoin valable Que pourrait il se passer si le fait de rapporter le gene via un plasmide ne redonne pas le phenotype sauvage.  [...]

Automédication

Il ne faut pas prendre n'importe quel antibiotique pour n'importe quelle maladie. Chaque antibiotique agit d'une manière particulière sur les bactéries et ce qui marche pour l'une ne marche pas forcément pour l'autre. Certains antibiotiques tuent les bactéries, d'autres bloquent leur croissance et permet aux globules blancs de les digérer avant qu'ils ne puissent se reproduire.  [...] De plus les bactéries finissent par acquérir une résistance aux antibiotiques si le traitement est mal adapté ou mal suivi, c'est à dire arrêté avant l'heure. Et puis si on veut faire une recherche des bactéries qui ont provoqué la maladie, la prise sauvage d'antibiotiques gêne leur mise en évidence au niveau du laboratoire.  [...]

culture bactérienne

voilà,j'ai effectué une culture de bactéries souche Lac- (c'est à dire incapable d'utiliser le lactose) et une souche sauvage dans des milieux de composition identique.  [...] C'est effectivement l'explication la plus plausible. toutes les bactéries ont commencé à croître grâce au glucose (leur substrat préférentiel), puis les lac+ ont utilisé le lactose tandis que les lac- n'avaient plus de ressources.  [...]

[Génétique] Manipulation génétique chez procaryote

Une banque genomique de la souche sauvage (WT) E.Coli est prepare dans un plasmide pBR322 qui confere la resistance a l'ampiciline(Amp R). Les plasmides recombinants de la banque sont transforme dans la souche L3 de E.Coli dont le genotype est polA. Trois clones L3 Amp R sont ainsi selectionés.  [...] Tu transformes des bactéries E.Coli, polA -, avec ces plasmides. Si le plasmide (sa séquence intégrée) ne contient pas polA, alors il ne sera pas répliqué et finira par disparaitre. En revanche s'il contient polA il sera conservé.  [...]