• Santé - Anticorps, Sites, Fixation

[Biologie Moléculaire] Il y a t-il une séquence promoteur chez les eucaryotes?

Il y a aussi des HRE = Hormone Response Elements, des sites de fixation aux hormones lipophiles (tyroidiennes, aldostérone,...) ou aux cofacteurs qui leurs sont associés.  [...] Je voudrais rajouter que chez les procaryotes, les sites de régulation de la transcription sont petits et proches. Ils sont situés généralement en amont des promoteurs. La fixation des protéines régulatrices au niveau de tels sites stimule ou inhibe directement la fixation de l'ARN polymérase.  [...]

[Biochimie] Nombre de tête de myosine dans une molécule de myosine

J'aimerais savoir si la tête de myosine est en fait composée de 2 têtes de myosines,et sachant que chaque fragment S1 permet l'hydrolyse de l'ATP et la fixation à l'actine,peut-on dire qu'il existe 2 sites d'hydrolyse de l'ATP dans une tête de myosine et deux sites de fixation à l'actine.  [...] Et dans cette paire de têtes glouleuses,il y a deux sites de fixations à l'actine et deux site d'hydrolyse de l'ATP( dans mon cours,les schemas semblent représenter une seule des deux tête de la tête de myosine,je me suis donc dis que c'était pour des raisons de facilité de compréhension...).  [...]

Problème de traduction publication.

On parle ici d'ARNr bloquants car, comme dans toute hybridation (ELISA, Western, Southern...) on previent toute liaison non specifique en saturant les sites de fixation aspecifiques avec des generiques (proteines de lait ou BSA pour ELISA et Western, ARNr ici).  [...] C'est ce qu'on appelle bloquer les sites de fixation non specifique du substrat que l'on veut mettre en evidence.  [...]

[Biologie Moléculaire] Généralité génétiques(ADN,gène,chromosome s..)

Pour ce qui est des parties codantes et non codantes, le sujet est assez récent (dans le sens finalement on ne sait pas grand chose). On constate juste qu'en effet une très grande partie du génome des animaux et plantes supérieurs (entendez par là apparuent plus tard dans l'évolution) est non codante et que certains effets de régulation leur sont aussi associés.   [...] Toutes les cellules du corps humain contiennent le même ADN réparti sur les 23 paires de chromosomes (= 46 molécules d'ADN). L'ensemble de cet ADN est appelé génome. Par contre, ce sont différents gènes qui s'expriment selon le type de cellule. Evidemment, il y a de nombreux gènes qui s'expriment dans toutes les cellules pour assurer le fonctionnement de base (respiration, transcription, traduction, métabolisme primaire.   [...]

[Biologie Moléculaire] Site de glycosylation

comment retrouver ces sites car je ne voie pas quel est la particularité de la fixation d'un sucre (c'est bien ca).  [...] Il s'agit de reconnaitre la séquence particulière Asn-x-Thr. Les enzymes qui glycolisent reconnaissent cette région et accrochent des sucres sur Asn.   [...]

site catalytique = site actif ???

Mais il existe aussi des sites regulateurs qui vont modifier l'activité de l'enzyme en fonction de divers parametres tels que la fixation d'un effecteur, ou une modification post-traductionnelle (phosphorylation).  [...] Or j'aurai tendance a penser que ces deux types de sites peuvent etre regroupés sous l'appélation 'sites actifs, puisqu'ils jouent tous les deux un role important dans l'activité de l'enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

Y a-t-il une différence entre laisser incuber son anticorps 1aire pendant 2h et overnight Est-ce que le signal s'emplifie en fonction du temps d'incubation avec l'anticoprs corps, ou bien est-ce que c'est une réaction qui a lieu au bout d'un certain temps (notamment 2h) et qui s'arrête ensuite.  [...] Les anticorps sont assez affins pour leurs épitopes, une fois que c'est fixé ça ne doit pas bouger. EN tout cas la fixation atteint un maximum assez rapidement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sperme de saumon

Saturer les sites libres de la membrane empechent donc la fixation aspécifique de la sonde, et donc un bruit de fond trop important.  [...] Une autre explication peut aussi être la saturation des séquences répétées au niveau des séquences d'acides nucléiques cibles, la encore pour éviter les fixations aspécifiques.  [...]

[Biochimie] Western Blot

Pour certains anticorps on recommande le TBS plutot que le PBS. J'ai notamment vu cela pour des anticorps anti-phospho.  [...] En ce qui concerne les temps de lavage, 3x10 min en 1ere intention est une bonne stratégie. Tu peux ensuite adapter en fonction de ton anticorps. Plus de lavage s'il y a des fixation aspécifiques, et du bruit de fond sur la membrane. Moins de lavage (en durée) si l'anticorps est très spécifique, que ton signal est fort, et donc que tu fais des expositions courtes.  [...]

ELISA courbe d'etalonnage

ok pour l'elisa sandwich mais pour l'indirect, il sert surtout à révéler des anticorps (ex dans le sérum) pour les doser c'est plus complexe car il te faut obligatoirement des solutions d'anticorps standard qui te permettront de calibrer le test et tu traceras la courbe A (on ne dit plus DO) =f(Ac) standard par exemple.  [...] pour la question de BeforeDaylight, je crois que les puits colorés traduisent une réaction positive aussi bien dans Elisa directe que indirecte, puisque la coloration signifie la fixation des anticorps couplés à une enzyme.  [...]