• Santé - Antibiotique, Agent, Toxique, Cellule, Intérêt

sélection par résistance à un antibiotique ou agent extérieur

Bonsoir à tous, je ne comprends pas en quoi devenir plus résistant à un antibiotique ou un agent toxique permet de vérifier qu'une cellule hôte dont on veut introduire un gène d'intêret ait bien été intégré.  [...] Pour vérifier la bonne transfection de tes bactéries (par exemple) par ton plasmide ayant le gène d'intérêt, en ayant un gène de résistance à un antibiotique dans ton plasmide, tu vas sélectionner uniquement les cellules ayant reçu le plasmide, car.  [...]

marqueurs de sélection

Ce gène est appelé marqueur de sélection. Deux types de marquer de sélection sont utilisés chez les levures. des gènes permettant de complémenter une mutation auxotrophique ou des gènes conférant la résistance à un antibiotique ou à un agent toxique.  [...] deuxièment, si il faut que la cellule hote soit mutée et qu'il faut utilisé un marqueur pour détecter qu'elle a une mutation et qu'elle a bien recu le fragment d'ADN puisqu'elle continue a vivre, celà veut dire qu'on ne peut pas inséré n'importe quel gène d'interet à une cellule hote.  [...]

[Génétique] Production d'interleukine 2

Puis tu fais une culture sur boite de petri avec une sélection par un antibiotique correspondant à ton plasmide. De la tu repiques une colonie et tu fait une culture liquide à partir de cette dernière. A cette étape il est important de valider ta construction par un séquençage et une PCR, après avoir extrait une petite quantité de ton plasmide (ex.5ml de culture extrait par mini prep).  [...] Pour produire la protéine à partir de là, il faut que tu réalises une transfection en cellule eucaryote (HEK293 par exemple) en utilisant un agent de transfection (lipofectamine...). Tu appliques également une pression de sélection par un antibiotique. Là il va falloir attendre un peu et comparer la mortalité de tes cellules avec des HEK non transfectées également sous antibiotique.  [...]

Pourquoi un virus n'agit-il pas tout de suite ?

Puisqu'on parle de virus, un ami me disait qu'on ne pouvait rien faire vraiment contre un virus une fois qu'on l'a chopé. Il est vrai que les antibiotiques seraient bien entendu inefficaces, et qu'il est trop tard pour vacciner, mais n'existe-t'il pas des sérums (des renforts en anticorps si j'ai bien compris) Ces sérums sont-ils efficaces.  [...] Comme son nom l'indique, un antibiotique est un agent qui est contre la vie.il détruit les cellules vivantes. or, les virus ne sont pas à proprement vivants (bien qu'il y ait des débats entre scientifiques à ce sujet)par eux mêmes. pour se multiplier, ils doivent s'infilitrer une cellule vivante, puis ils utilisent les ressources de leurs hôte pour se multiplier.  [...]

Cystite : les bactéries avancent cachées

Lors des infections urinaires qu'elles provoquent, les bactéries Escherichia coli commencent par développer des colonies à l'intérieur même des cellules de la vessie. Une tactique exceptionnelle déjà repérée chez la souris mais qui est désormais fortement soupçonnée chez l'Homme.  [...] Pourquoi le taux de récidive des cystites dépasse-t-il 40 % après un traitement antibiotique qui semble avoir eu raison de l'agent infectieux Parce que le coupable, en l'occurrence le colibacille Escherichia coli ( E. coli ), pénètre à l'intérieur des cellules de la vessie et s'y multiplie, formant de véritables colonies dormantes qui produiront plus tard une nouvelle infection.  [...]

[Biochimie] Le sybr Green et l'ADN

Sûrement que ces paramètres n'étaient pas jugés extrêmement importants au point d'empêcher la commercialisation de la molécule. Surtout sachant que l'alternative comme agent intercalant, le bromure d'éthidium était (est) très toxique.  [...] Et puis, je dirais qu'on étudie toujours les bactéries des fromages alors que ça fait 2 000 ans qu'on en fabrique. Molecular Probes a sorti une molécule qui fluoresce dans l'ADN, d'autres se sont dit tiens ça serait intéressant dans une PCR. Même le pourquoi de la fluorescence parait peu claire, du moins d'après certaines sources que j'ai lue mais bon elles avaient 4 à 5 ans, c'est peut être mieux connu maitenant.  [...]

[Immunologie] différence entre lyse et apoptose ?

Effectivement la lyse d'une cellule entraine un relarguage de son contenu cytoplasmique dans le milieu exterieur sous l'effet d'une action mécanique ou chimique (exemple. Broyage mécanique). C'est un effet qui est visible lors des processus de nécrose cellulaire.  [...] L'apoptose peut être la conséquence d'un vieillissement cellulaire, mais peut également intervenir suite à de nombreux stimulis extérieurs tels que des drogues, des infections par des agents pathogènes, des molécules cytotoxiques (Système immunitaire) etc.  [...]

IFITM3, la protéine humaine qui empêche les virus d'entrer

Et si le vieil adage selon lequel on n'est jamais mieux servi que par soi-même s'appliquait aussi à la lutte contre les virus Des chercheurs de la Keck School of Medicine, affiliée à l' University of Southern California, viennent de mettre en évidence que le corps humain dispose lui-même d'un mécanisme capable de bloquer la pénétration virale dans les cellules, par l'intermédiaire d'une protéine. IFITM3. Cela mérite quelques explications.  [...] Certaines cellules, une fois infectées par un virus, produisent une molécule appelée interféron, qui va stimuler la synthèse de nombreuses protéines impliquées dans l'immunité. Parmi elles, IFITM3 ( interferon-inducible transmembrane protein 3 ). Les chercheurs viennent alors de montrer que celle-ci perturbe l'interaction entre deux autres protéines, VAPA et OBSP, impliquées dans la régulation de la concentration en cholestérol intracellulaire.  [...]

Cancer du sein : vers un traitement des tumeurs « triple négatives » ?

Un essai clinique présenté à Orlando (Floride) au 45ème Congrès de l' American Society of Clinical Oncology (ASCO) prouve l'intérêt thérapeutique de l'agent anti-cancéreux BSI-201. Son principe actif est révolutionnaire. il tacle le point fort des cellules cancéreuses à savoir leur capacité à se réparer.  [...] désarmer ces cellules rebelles pour les rendre sensibles à la chimiothérapie. Comment En inhibant, à l'aide d'un nouvel outil (le BSI-201), une enzyme appelée PARP (poly(ADP-ribose) polymérase ). Cette enzyme est produite quand l' ADN a subi des dommages et sert à sa réparation. Et cela marche.  [...]

proteine ou cellule stable ???

Pour les lignées cellulaire, je comprends un lignée stable comme une lignée exprimant stablement une protéine d'intérêt. Il faut mettre en opposition les lignées stables au lignées transitoires. Je m'explique, dans le cas d'expression hétérologue d'une protéine dans une cellule eucaryote on peut soit.  [...] ii) transfecter stablement avec un plasmide qui contient le gène d'intérêt et un gène de résistance, on ajoute un agent de sélection, donc seuls les cellules qui possèdent le plasmide survivent, et au final, il y aurait intégration du plasmide dans le génome.  [...]