• Santé - Amplification, Méthode, Fonction

[Biologie Moléculaire] Plan de plaque, validation de méthode...

Le but est de mettre en évidence des degrés de variation de l'amplification de la méthode en fonction de ces isolats. En gros évaluer la sensibilité et spécificité de la méthode en fonction de paramètres comme répétibilité, la manip inter et intra-opérateur.  [...] Pour la spécificité, généralement elle est déterminée en réalisant une melting curve en fin de réaction d'amplification avec du Sybr green pour contrôler qu'un seul fragment a été amplifié.  [...]

Séquençage

DOnc puisque la séquence génomique est inconnue, selon toi il est impossible d' effectuer une PCR...car le problème réside dans les amorces nécessaire à cette étape...mais suite à l'amplification de nos insert dans les vecteurs...il faudra bien que l'on dessine des amorces pour que la méthode de Sanger puisse fonctionnée.  [...] Il est possible d'amplifier un génome inconnu grâce à l'utilisation d'amorces universelles et/ou dégénérées. C'est la méthode utiliée pour l'identification bactérienne par RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA).  [...]

[Biologie Cellulaire] Rt-pcr

pour la méthode RT-PCR, quel est le principe de la rétrotranscription et quelle est son interet pour la réaction d'amplification PCR.  [...] La RT-PCR a été mise au point pour utiliser les ARN comme matrice d'amplification de la PCR. Elle est certainement la méthode la plus sensible pour détecter (et éventuellement quantifier), les ARN messagers au niveau d'un organe, d'un tissu ou d'une cellule.  [...]

PCR (amplification génique)

Bonjour, ma question concerne donc la technique PCR qui consiste à amplifier de façon exponentielle un fragment d'ADN. Je comprends bien le protocole, mais en fin de compte à quoi ça sert concrètement.   [...] Souvent en biologie on est limité par la quantité de matériel biologique. La PCR est donc une méthode géniale et puissante puisque l'amplification est exponentielle. En plus les cycles de PCR sont relativement courts (environ 3 minutes il me semble) ce qui fait gagner beaucoup de temps par rapport à une amplification sur culture de bactéries transformées (beaucoup moins d'étapes aussi).  [...]

Fabrication d'une puce à ADN

Cela offre des donnés qualitatives ( quels sont les genes exprimés dans telle situation ) et quantitatifs (à quel niveau sont ils exprimés).   [...] Non pas d'amplification car tu veux justement quantifier ton expression par l'intensité de révélation qui sera fonction du nombre d'ARNm présent dans ton échantillon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr-sbt

Le séquençage des gènes est amplifie par PCR. Le SBT, de la PCR-SBT (Sequence-Based Typing), permet l'identification précise de tous les nucléotides de la région d'ADN amplifiée.   [...] Concernant la PCR-SBT, j'en ai rarement entendu parler. Le peu que je sais a été dit par Heloradana. c'est une méthode d'amplification classique qui permet en plus un séquençage de la séquence nucléotidique.  [...]

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger

[Biologie Moléculaire] De la PCR à la méthode Sanger.  [...] Après l'amplification d'un brin matrice par PCR, il y aura des produits PCR, pour un séquençage par la méthode de sanger, ces produits pcr doit être purifiés mais lors de la réaction de sanger, comment on évalue la concentration d'ADN, c'est à dire après la PCR on obtient plusieurs fragments d'ADN alors que par la méthode sanger c'est un seul fragment qui sera séquencer à ma connaissance.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification d'ARN

La conversion en ADN par transcription inverse, amplification de l'ADN par PCR puis la transcription en ARN est-elle la démarche la plus pratique.  [...] Une autre methode consisterai a faire de la transcription in vitro, mais c'est pas vraiment de l'amplification stricto senso (par contre avec la deuxieme methode tu recuperes des ARN, non pas de ADN).  [...]

[Biologie Moléculaire] ligase chain reaction

bonjour a tout le monde,s-v-p aidez moi j'ai pas trouvé grand-chose sur la reaction de liguature en chaine (c'est une methode d'amplification du gene) j'ai fait baucoup de recherche mais qa la fin j'ai 0000 d'information(le principe les applications les avantages,etc...)bonne journée.  [...] Les termes anglais donnent souvent bien plus de résultats.   [...]

[Biochimie] (licence/master) Question sur la pcr pour un rapport de stage, merci

c'est une PCR utilisant de petites amorces de séquences aléatoires ( 8-12 nucléodites)comprenant (60 à 70% G et C) puis une identification sur gel. C'est un moyen rapide pour identifier plusieurs espèces. C'est une méthode très sensible. Il y a pas besoin de connaitre les génomes.  [...] C'est une méthode de PCR récentes, qui utilise des amorces spécifiques, elles permettent d'amplifier plusieurs ADN cibles en même temps. L'ADN de chaque amplification est quantifié à tous les cycles par fluorescence spécifique pour chaque ADN cible. Il faut une connaissance du génome des différents parasites.  [...]