• Santé - Amorces, Sites, Restriction, Hybridation

PCR clonage

Tu as calculé comment ton Tm pour tes amorces avec sites de restriction Tu as peut être tout simplement un problème d'hybridation de tes amorces à cause d'un Tm inapproprié.  [...] mais je comprends pas uen chose, quand on veut rajouter les sites de restriction, qu'elles sont les mesures a prendre en consideration pour ne pas tomber dans ce genre de probleme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique SELEX aidez moi!

1. créer un grand oligonucléotide matrice avec trois choses. deux sites d'amorce sens et antisens. Un région centrale (20-25 ntd) que l'on synthétisera pour chacun des oligo de manière aléatoire.  [...] Ainsi on a une collection d'oligo de régions aléatoires portées sur des oligonucléotides bordés de sites d'hybridation pour deux amorces.  [...]

[Biologie Moléculaire] A Propos De BioEdit !

Je Voulais savoir comment pourrais-je visualiser les sites d'hybridation des amorces après alignement des séquences grâce au logiciel Bioedit.  [...] Si j'ai bien compris ce que tu demandes, il te suffit d'aligner la séquences de tes amorces (ou le reverse complément) avec les séquences et tu auras le site d'hybridation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

Il est plus probable que ton probleme provienne d'hybridation aspecifique de tes amorces sur le genome. En augmentant la temperature d'hybridation tu devrais résoudre le probleme. Autre possibilité, Il y a d'autres sites de fixation de tes amorces dans le génome.  [...] Sinon pour l'hybridation aspécifique, l'autre groupe (je rappelle que c'est dans le cadre d'un TP) n'a pas eu ce soucis, donc cette théorie ne me parrait pas trés posible dans ce cas..Et on fait ça sur des plasmides alors la fixation sur un autre site reste limité je pense.  [...]

[Génétique] clonage orienté ou non

On digerait alors le plasmide et l'insert par des enzymes différentes A et B générant des sites de restriction non compatibles.  [...] enfin bref dans le 2ème cas il faut choisir deux sites de restriction différents mais que plasmide et insert on en commun.  [...]

[Biotechnologie] Principe de la PCR

La deuxième période s'effectue à une température généralement comprise entre 40 et 70°C, dite température d'hybridation des amorces. La.  [...] par une meilleure stabilité de la liaison au moment de l'hybridation des amorces. Plus les amorces sont riches en cytosines et guanines, plus leur.  [...]

Température d'hybridation et PCR

La denaturation s'effectue a 94°C pour séparer les deux brins d'ADN. Les amorces etant en large exces par rapport a la matrice lors de l'hybridation (a un Tm bas pour etre certains qu'elles s'apparieront) leur hybridation avec la matrice est favorisée.  [...] pour obtenir une amplification il suffit que l'extrémité 3' de chaque amorce soit bien hybridée. c'est comme ça qu'on obtient des amplifications non spécifiques ou qu'on ajoute des sites de restrictions à une séquence d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

L'objectif de ce clonage est de récupérer une partie d'un vecteur, pour se faire une amorce foward a été faite pour pouvoir intégrer un nouveau site de restriction, l'amorce reverse elle doit intégrer plusieurs sites, l'insert que l'on doit obtenir doit faire environ 1500-1600bp.  [...] A une température aussi basse d'hybridation, la stringence étant moins forte il peut y avoir une formation de structures secondaires empêchant la PCR, sur les amorces ou sur la matrice. Essayes une température plus haute comme le recommande YouLab, à 60°C, cela peut résoudre ton problème.  [...]

[Génétique] marche sur chromosome

En pratique, tu sais quelle est la couleur du marqueur des bords. On cherche donc à faire apparaître un site, par hybridation (et reconnaissance par fluorescence par exemple). Si ce site n'a pas été coupé par une enzyme de restriction, il doit apparaître 10 fois (puisque tu as 10 banques).  [...] Puis tu cherches à allumer un second site. Ce site s'allume sur de nouveaux segments mais aussi sur des segments déjà allumés par le précédent marqueur. Ce sont des segments qui se chevauchent (car ils n'ont pas été coupés aux mêmes endroits à cause des différentes enzymes de restriction).  [...]

[Biochimie] Demande de definitions

Bonjour, ça pourrait parraître bête mais bon j'arrive pas a serner la signification d' hybridation des amorces ainsi que la polymérisation.Ceci ayant un rapport avec le marquage par multiamorçage ou random priming.  [...] Falindor avait partiellement raison en parlant de l'ARN. En effet pendant la réplication chez les eucaryotes, le brin retardé est synthétisé a partir d'amorces d'ARN. Cependant on ne parle pas à ce moment d'hybridation puisque les amorces sont synthétisées directement sur place.  [...]