• Santé - Amorces, Séquence, Template, ADN

[Biologie Moléculaire] Connaissez -vous un outil d'analyse d'affinité d'un primer pour une séquence ?

Puisque mon Forward primer (=droit) est complémentaire à la molécule d'ADN template, son hybridation avec cette dernière lance le processus de RCA. Mais l'autre amorce, l'amorce renversée (Reverse primer=gauche) est conçue pour être complémentaire du produit de RCA (ce qui signifie que sa séquence est identique à une partie de la molécule d'ADN template), ainsi cette amorce seule, sans la première, n'est pas censée s'hybrider au template et lancer elle aussi une RCA. La réaction est @ 30°C en isotherme.  [...] Mais j'obtiens bien un produit de RCA (observé contre un controle sans molécule template d'ADN = aucune amplification) avec l'une ou l'autre amorce alors que sans le Forward primer, la réaction n'est pas censée se produire avec le Reverse primer seul.  [...]

PCR, template et riz anti-alzheimer

- on se sert du gene codant pour APP656 comme template. Les plaques AB étant issues de la découpe de cette protéine, on peut donc considérer que le gène codant pour AB se trouve quelque part dans le gene de APP.  [...] 1) un template peut être n'importe quelle séquence d'ADN. Ce terme désigne ce qui sert de base dans une PCR, un original en quelque sorte.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

Ensuite, il faut refaire une pcr en utilisant le résultat des deux pcr précédentes comme template et les amorces non mutées qui encadrent donc la région mutée et qui comprennent les deux sites de restriction.  [...] Ensuite, il faut refaire une pcr en utilisant le résultat des deux pcr précédentes comme template et les amorces non mutées qui encadrent donc la région mutée et qui comprennent les deux sites de restriction. alors la c'est definitif je suis dans le champs, je vais attendre que l'image soit validee pour voir si ca m'eclaire.  [...]

Sens d'orientation des brins de l'ADN

Oui, les ARn polymérase étant avant tout des nucleo 3' transferase. C'est le brin complémentaire de l'ADN qui sert de template lorsque le sens du gène est inversé (même si tout dépend de comment l'on regarde).  [...] C'est le brin complémentaire de l'ADN qui sert de template lorsque le sens du gène est inversé (même si tout dépend de comment l'on regarde).  [...]

Télomères

Seulement a chaque réplication on est forcé de perdre un peu de télomère car pour avoir l'extrémité d'un brin il faudrait avoir une amorce derrière cette extrémité, ce qui n'est pas possible ducoup on en perd un petit morceau a chaque fois,  [...] et la resynthèse sans template se fait grâce à la télomérase qui, elle, peut allonger le télomère même sans template en face puisque la séquence qui permet de former le télomère par complémentarité se trouve (dans le cas de la télomérase) dans la protéine directement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification infructueuse

J'utilise la Taq de invotrogen, mais dans leur protocol ils prennent un volume total de 100 microlitres, cependant pour le template ils disent juste 1-20 microlitres, (ce qui en soi est une fourchette assez élevée) et ne donnent pas d'indication sur la quantité d'ADN en ng optimale a prendre,  [...] J'utilise 1 microlitre (80ng/microlitre) de template ADN du coup comme ils précisent pas grand chose d'autre peut être que c'est trop pour un volume total de 25, mais comme pour 100 ils disent jusqu'à 20... sans préciser de concentration.  [...]

[Biologie Moléculaire] efficacité acceptable qPCR ?

En revanche, je ne savais pas que des dimères d'amorces pouvaient diminuer l'efficacité (mais ça paraît logique). Néanmoins, je n'ai rien dans mon contrôle no template (master mix + amorces + eau), donc je suppose que je n'ai pas de dimères d'amorces.  [...] Bizarrement chez moi les dimeres apparaissent souvent en presence de template. Tu devrais essayer de deposer la totalite de tes produits qPCR sur gel pour voir ce que tu obtiens.  [...]

[Génétique] Quelques questions diverses

Seulement, l'ARN polymérase peut prendre un brin d'ADN comme template ou l'autre. En fonction qu'elle choisisse l'un ou l'autre, le brin d'ARN sera différent et codera dont pour une autre protéine ce qui n'est pas possible... Ma question est donc. est-ce toujours le meme brin qui est utilisé par l'ARN poly pour servir de template à la formation de l'ARN mes.  [...] Les ORI eucaryotes ne pr ésentent pas de séquence consensus clairement identifiée. Il semblerait que plus de la séquence, ce soit la structure de l'ADN à ce niveau qui soit important. Reste que ce sont tout de même des séquences AT riches, effectivement distinctes des TATA box.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

il faudrait que tu fasses un contrôle négatif de RT (par exemple un échantillon sans reverse transcriptase) et ensuite plusieurs contrôles négatifs de PCR (un sans template, un sans enzyme et un sans amorces).  [...] ça peut venir de tes amorces si tu n'as pas d'amplification avec d'autres échantillons de bonne qualité, elles ne sont peut-être pas spécifiques de ton 28S.  [...]

[Biochimie] Besoin d'aide pour traduire un extrait de biologie

This product, extended by Taq polymérase, was used as template in a PCR to assemble de whole fragment. In this amplification reaction 100 pmol of each primer was used for synthesis of the recombinant S100A12 coding sequence.  [...] A ce qu'il paraît, ils ont fait un premier clonage de la séquence complète. Ensuite, digestion de cette dernière avec NdeI et BamHI ce qui a produit différents fragments. Ceux-là ont été sous-clonés dans 2 différents plasmides, le premier produisant un peptide avec un His-tag et l'autre non taggué.  [...]