• Santé - ADN, Tubes, Concentration

Variation de la concentration d'ADN dans les tubes de plastique?

Allo, j'ai un problème à résoudre. Je fais des expérience sur des tubes en polypropylène pour l'entreposage de l'ADN génomique à 4°C et j'ai remarqué que dans le temps la concentration de mon ADN varient. Lorsque mes tubes ont été préalablement autoclavé, j'ai une perte que a de 20 à 50% de la contration de mon ADN.  [...] J'ai déjà essayé une marque de tube supposément low binding, mais la concentration de mon ADN dans ses tubes varie quand même. Est-ce que tu aurais des suggestions de fournisseurs à me proposer.  [...]

échantillons d'adn

Stockage de l'ADN dans des eppendorfs à bouchon vissés (screw tubes), par plaques de 96. Ca prend pas beaucoup de place (je dirais 250 personnes par dcm3(un litre quoi)).  [...] Après ca dépend de ce que tu veux faire dans ton roman de cet ADN. Si c'est pour du génotypage (ca doit pas être vendeur comme sujet de roman), vaut mieux stocker l'ADN dans ces tubes à une concentration de 20 ng/µL par exemple. Si c'est pour raconter un truc du genre ils stockent de l'ADN pour cloner des gens 10 ans plus tard, là je peux pas t'aider.  [...]

Normalisation RT-PCR quantitative

Le problème, c'est que tes 2 échantillons ne sont pas probablement tout à fait à la même concentration. Pour corriger ce facteur, on réalise souvent une 2e PCR avec un gène de contrôle dont l'expression est censée ne pas varier entre les 2 conditions. Dans ce cas, tu vas comparer l'écart de cycle entre le Ct de ton gène-cible et le Ct de ton gène de contrôle dans chacun des 2 échantillons.  [...] Personnellement, je trouve que cette méthode a des limites. les plasmides sont si petits qu'il faut utiliser les concentrations très faibles d'ADN (fg). Dans ce cas, l'ADN a tendance au bout d'un moment à se coller aux parois des tubes en plastique (charges électrostatiques) dans lesquels tu stockes ta gamme.  [...]

Besoin d'avis pour optimiser extraction d'ADN à partir de tissu FFPE en vue d'une CGH

Burcu Sengüven ont montré que les plus grandes concentrations d'ADN ont été obtenues lorsque le déparaffinage a été réalisé sur lames et bains de Xylène plutôt que dans des tubes (or, nous l'avons réalisée avec le kit de déparaffinage de QIemp, dans des tubes) et que plus le traitement à la protéinase K est long, meilleurs sont les résultats (ils obtiennent un bien meilleur ADN après avoir traité à la protéinase K pendant 72h, plutôt que pendant une nuit, or nous n'avons traité que 3h.  [...] ps. me confirmez vous que le Nanodrop me permet d'identifier la présence de contaminants et la concentration d'ADN, mais pas sa qualité Raison pour laquelle j'ai besoin du Qubit...en gros, il faudrait peut être que je réalise mon protocole à partir d'une plus grande quantité d'échantillon, afin d'obtenir plus d'ADN de bonne qualité, pour que le marquage en random-priming fonctionne.  [...]

[Biochimie] Dosages et composition cellulaire

Tout d'abord, j'ai donc effectué un dosage d'ARN dans 15 tubes différents (les 7 premiers contenants une concentration connue et les7 autres contenant de l'arn que j'ai récupéré sur mes foies et reins) et j'ai tracé la courbe Absorbance =f([Concentration]).  [...] Une fois tracée, je n'ai plus qu'à lire les absorbances des ARN de conentrations inconnues, et grâce à courbe tracée par les 7 premiers tubes, trouver leur concentration en ARN.  [...]

[Biochimie] Coloration Bradford.

Donc tu détermines la concentration protéique de tes tubes. En connaissant le volume total d'échantillon, tu le multiplies par la concentration trouvée et tu tombes sur la masse totale de protéines présente dans chacun des tubes.  [...] Une question. ta courbe étalon est en fonction d'une masse connue d'albumine ou d'une concentration d'albumine En effet, la démarche de calcul sera différente selon l'un ou l'autre cas.  [...]

[Biochimie] Résultats de purification de lysozymes

je vous mettrai le gel aussi (voir plus bas). Comme en F5 et F6 (vu la perte en lysozyme) il y avait une faible concentration on a du utiliser des tubes à concentré, avec les fractions de nos collègues, on a placé dans le tube et mis à concentré, ok je suis d'accord avec ça.  [...] .. (vous comprenez ce que je veux dire) Alors pour ça on utilise une tube à concentré. On a un volume initiale de solution après centrifugation, les 3/4 du liquide sont dessendu dans le fond tube on prélève le filtrat, onlit un volume appelé volume final. On calcul le facteur de concentration Volume final/ volume initial.  [...]

[Biochimie] Tp Calcul de vitesse initiale

Lors de mon dernier tp il m'a était demander du calculer les vitesses de réaction des tubes de différentes concentration que j'ai préparer.  [...] Je dispose de la concentration en substrats(PNPP) initial de tout ces tubes, ainsi que leur absorbance une fois la réaction terminée, de plus j'ai calculé dans la première partie de mon tp le coefficient d'extinction molaire du produit (PNP).  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

Tu dis avoir fait une régression avec le résultat de tes échantillons...qui devaient être des contrôles avec des concentrations d'ADNc connus afin de réaliser une gamme et de venir placer le résultats de ton échantillons test dessus, n'est ce pas.  [...] Il ne faut pas oublier non plus que la progression de la concentration dans ton échantillon n'est pas linéaire. Un Ct d'écart entre 2 tubes, ça veut dire que la concentration de tes cibles était de 1 et de 2 entre tes tubes, un écart de 10 Ct c'est 1 et 1024.  [...]

[Biochimie] Méthode de Bradford

de mon coté je rencontre des difficultés pour tracer la droite,je sais que ça sera la DO en fonction de la concentration de BSA.mais le problème c'est qu'on a utilisé 5 tubes dont un est le blanc plsu deux autres de 1/10 et 1/100 de serum dilué (notre échantillon à doser est l'immun serum),dans ce cas la comment je tracerai ma droiteest-ce qu'elle passera par le zero ou nonet comment interpréter mes résultats.  [...] et bien c'est simple. Normalement tu dois connaitre la concentration de tes 5 tubes qui contiennent de la BSA (concentration différente à chaque fois, qui double par exemple). A partir de là, tu as du les doser et tu connais donc maintenant leur DO.  [...]