• Santé - ADN, Intérêt, Sites

[Biochimie] Manipulation de l'ADN: plasmide

Les plasmides utilisés en recherche sont souvent des plasmides très modifiés par les sociétés qui les vendent. Afin de pouvoir insérer facilement des portions d'ADN d'intérêt dans le plasmide, on a prit l'habitude de placer des sites de restriction. C'est à dire des sites reconnus par des enzymes capables de couper l'ADN.  [...] L'avantage de ces enzymes est qu'ils coupent des séquences en acide aminés très spécifiques et forment (souvent) ce qu'on appelle des bouts collants (ils ne coupent pas les doubles-brins nets mais laisse dépasser un des deux brins). L'intérêt de ceci est qu'un bout collant généré par une enzyme de restriction aura tendance à s'attacher à un bout collant généré par la même enzyme.  [...]

[Biotechnologie] système conditionnels

J'ai ecris un document qui devrait finir par être publié tot ou tard sur futura-sciences. Si tu as la possibilité d'attendre. le document fais plusieurs pages et il y a à peu près tout pour répondre à tes questions dedans.   [...] Pour faire rapide, tu introduis par recombinaison homologue des sequence de recombinaison de l'ADN (2 sites lox) de part et d'autre de la sequence du gene que tu veux eliminer. Ces sequences lox sont reconnues par une recombinase (Cre) ce qui fait que si tu croises des souris dont le gene d'interet a ete modifie avec des sites lox avec une souris dans laquelle tu as introduit la Cre, si les descendant recuperent les deux genes et (c'est la l'interet du systeme) qu'ils s'expriment dans le meme tissu (choix d'un promoteur specifique en amont de la Cre par exemple), tu auras deletion irreversible de la sequence d'ADN entre tes sites lox et donc un KO conditionnel.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADN Hélicase

Petite question. Qu'elle est l'intérêt d'une ADN Hélicase à agir sur de l'ADN monocaténaire Quand l'ADN est bicaténaire je comprends bien puis ce que c'est une contrainte le fait qu'il soit sous forme double brin mais là on est sous forme simple brin, l'ADN Hélicase n'a aucune utilité selon moi mais dans mon cours et sur des sites internet ils disent que l'ADN Hélicase agit également lors de la réplication d'ADN monocaténaire, quelqu'un pourrait m'expliquer.  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

La spécificité se fait sur 2 éléments, la complémentarité des amorces sur la séquence d'ADN, donc on aligne quelques centaines de séquences de différentes espèces pouvant être dans notre milieu et on choisit deux sites spécifiques de notre espèce d'intérêt.  [...] En fait on étudie la spécificité de l'amplification, déterminé par la taille de l'amplicon pour les raisons que j'ai expliquées, par une étape située après la PCR en elle même, comme lors d'une PCR normale. On part d'une température basse genre 50°C et on l'augmente progressivement jusqu'à 95°C où tous les brins d'ADN seront séparés.  [...]

cellules souches

Je ne sais pas comment vous entendez le terme de conditions. le milieu et les moyens permettant la culture ou si vous cherchez a connaitre les raisons qui incitent à ces cultures.   [...] Un plasmide est une molécule d'ADN circulaire capable de se multiplier de manière autonome dans un organisme procaryote ou eucaryote. Il possède une origine de réplication, un gène de sélection et généralement de multiples sites de clonage pour y insérer un fragment d'intérêt. =. définition de FS.  [...]

[Génétique] phage

bonsoir. J'espere que quelqu'un saura m'éclairer. la partie centrale des phages peut etre utilisée comme vecteur de clonage. mais, est ce qu'on retire cette partie pour la remplacer par un adn d'intéret, ou est ce qu'on enleve seulement quelques morceaux pour en faire des sites de restriction d'une enzyme de restriction spécifique, et alors l'adn que l'on veut cloner serait ajouté dans la partie centrale.  [...] mais, est ce qu'on retire cette partie pour la remplacer par un adn d'intéret, ou est ce qu'on enleve seulement quelques morceaux.  [...]

Projet clonage et expression d'un gène

Pour faciliter le clonage, il est possible d'ajouter à l'extrémité des amorces des sites de restriction (cohésifs, c'est mieux ). Une fois les amorces choisis et produites, la PCR peut se faire de deux manières. Soit sur colonie directement (prendre une colonie (ou moitié de)), puis amplifier directement l'ADN d'intéret (avec les bonnes température et temps d'élongation).  [...] Soit en purifiant de l'ADN bactérien (ou plasmidique, cela dépend où se trouve la séquence d'intérêt) à partir d'un bouillon de culture (cela permet généralement d'obtenir de l'ADN plus propre.  [...]

Mutagenèse dirigée : un Nobel pour des souris mutantes

L'intérêt n'apparaît pas immédiatement mais ce qu'il faut bien intégrer c'est que l'on dispose alors d'un outil permettant d'introduire le patrimoine génétique d'une cellule issue d'une souris dans une autre souris. L'année suivante (1985), Smithies parvenait à réaliser la première mutagénèse dirigée par recombinaison homologue atteignant spécifiquement le gène de la bêta-globine dans une cellule de mammifère.  [...] Par exemple et grossièrement, on utilisera un promoteur de kératine pour inactiver un gène dans la peau. Pour parvenir à ses fins il suffit alors de générer des souris dont les deux allèles du gène d'intérêt portent deux sites loxP dans le même sens et des souris porteuses du transgène Cre.  [...]

[Biotechnologie] recombinaisons site spécifiques par la technologie Gateway

dans un plasmide jouant le rôle de vecteur donneur et un fragment d'adn contenant le gène d'intérêt flanqué par deux autres sites attB1, attB2 (produit par PCR).  [...] Après recombinaison, le gène d'intérêt a donc été transféré sur le plasmide donneur est cette fois flanqué de deux sites attL1 et attL2 qui sont les produits de la recombinaison. c'est le clone d'entrée.  [...]

[Génétique] polymophisme(probleme)

salut les amis j éspére que vous allez bien,voilà j ai un sérieux probleme,je suis en période de controles et j ai besoin de vous.   [...] en polymorphisme génétique,la détection d un polymorphisme peut se faire avec RFLP bi-allélique, et le prof a parlé de sites polymorphes internes/sites polymorphes externes se trouvant sur les fragments d ADN analysés et hybridés à des sondes.que signifie ces deux expressions.  [...]