• Santé - ADN, Intérêt, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

Pour cela on clone dans un plasmide l'ADN codant pour la GST et l'ADN codant pour la protéine d'intérêt, de cette sorte les deux protéines sont fusionnées (elles sont accrochées l'une à l'autres).  [...] Pour la séparation de la GST fusionnée à la protéine d'intérêt, c'est peut-être à la digestion à la protéase de pré-scission (PSP (non pas la console ), au facteur Xa ou à la thrombine que tu fais référence.  [...]

liposome

je fais un pTPE sur la thréapie genique et j'aimerais avoir un peu plus de precision sur les liposomes, je ne comprends pas comment cette méthode permet d'integrer le gene medicament au noyau.   [...] Et donc ça permet de faire rentrer l'ADN d'intérêt dans la cellule. Mais il ya beaucoup d'autres techniques pour faire rentrer un plasmide ou un gène dans une cellule.  [...]

[Biologie végétale] Compréhension d'un article sur les OGMs

Dans le cas du plasmide Ti d'agrobactérium, de manière similaire on y ajoute notre gène d'intérêt qui va remplacer l'ADN-T, ce plasmide est réintégré au sein d'agrobactérium et ce dernier infecte ensuite une plante et transfert l'ADN-T, on obtient donc comme ça un OGM.  [...] 2) En 2.4 ils parlent de deux méthodes. Freeze-thaw et leaf disc. Le freeze thaw permet simplement de briser les cellules d' Agrobacterium tumefaciens pour que les vecteurs contenant le gène d'intérêt (qui remplaceraient donc le plasmide Ti ) entrent dans la cellule.  [...]

[Microbiologie] Superhélicité de l'ADN

D'après ce que j'ai compris la superhélicité Ã = LK/LK0 avec LK le nombre de fois où les deux brins d'ADN se croisent et LK0 = nb pb/10,45 pb. On prend un plasmide pBs qu'on met dans deux souches mutantes. une qui n'exprimera que la topA (topoisomérase I) et l'autre souche n'exprimera que topA et parC (topoisomérase IV).  [...] On retire le plasmide des cellules et le but est de savoir combien de molécules ont tant ou tant de supertours. Ils mettent de la chloroquine qui s'intercale entre les deux brins d'ADN et qui fige tout de la même manière (je vois pas trop son intérêt.s).  [...]

[Génétique] plasmide ADN distinct de l'ADN chromosomique

j'ai pas bien compris la définition du plasmide,surtout quand ils disent que c'est une molécule d' ADN distinct de l'ADN chromosomique.  [...] Il peut y en avoir plusieurs, et de différentes tailles (parfois plus grands que le chromosome), dans une même cellule.   [...]

Techniques utilisées en lab de biomol - Page 2

Oui, si ton plasmide n'a pas intégré l'insert, ta bactos va mourrir parce que dans le milieu de culture tu mets un antibiotique. Mais le vecteur que tu as inseré dans ta bactérie possède le gène de résistance à cet antibio ce qui permet de faire une première sélection antre bactos avec plasmide et bactos sans plasmide.  [...] Donc ce n'est pas parce que tu n'obtiens pas assez d'ADN d'intérêt que ta bactos n'a pas intégré le plasmide. elle a très bien pû intégré un plasmide vide (sans insert).  [...]

Technique du Double Hybride

Malheureusement comme explique ci-dessus tu as 99% de faux positifs, par exemple toutes proteines interagissant aspecifiquement avec l'ADN (proteines basiques) vont activer ton systeme. Ensuite tu as beaucoup de tests de verif a faire, (chasse du plasmide, croisement pour verifier que c'est bien ton plasmide qui active les systemes rapporteurs).  [...] Le grand intérêt de cette revue, c'est qu'elle possède une vision très pratique mais aussi un aspect théorique, ce qui est parfait pour le débutant qui souhaite comprendre le pourquoi et le comment. Par exemple, les auteurs discutent des différents paramètres à prendre en compte pour se lancer dans le criblage d'une banque.  [...]

Intégration de VIH-1 dans la chromatine: la chute d'un dogme.

Ce système fait intervenir un plasmide dans lequel on a cloné une séquence positionnant les nucléosomes afin de reproduire un polynucléosome après assemblage d'histones. Ce plasmide mime l'ADN cible cellulaire.  [...] Une fois le système opérationnel, on a réalisé de l'intégration in vitro sur ce plasmide chromatinisé en présence d'intégrase pure recombinante et d'un pseudo ADN viral.  [...]

[Biologie Moléculaire] Créer un plasmide...?

Sauf erreur de ma part (mais j'en suis presque sur), Craig Venter n'a pas cree un genome complet, il s'est contente de le re-assembler et de le mettre dans une cellule vide puis de le re-activer. Tu veux reellement creer un plasmide c'est a dire sans utiliser d'ADN deja existant A mon avis le plus simple est de faire synthetiser des oligos d'une centaines de pb, de les cloner bout a bout dans un plasmide connu, puis de virer la partie connue et de re-liguer ton super plasmide tout nouveau sur lui meme.  [...] Quand a creer un nouveau plasmide a partir de choses deja existantes, ben c'est encore plus facile, on fait ca tout le temps. Il suffit d'amplifier ton gene/sequence d'interet, de le cloner dans un plasmide la ou tu veux, et le tour est joue (dans ce cas la tu gardes le squelette plasmidique de depart).  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

Sinon le sens du contrôle négatif (je ne suis pas certain que cela ait été dit clairement) est d'évaluer indirectement la qualité de la coupure du plasmide. Si après vos restrictions il vous reste du plasmide non coupé, il va transformer. Ce qui est intéressant dans ce contrôle c'est de le comparer à votre boite expérimentale.  [...] prq ajouter de l'insert avec du plasmide mais sans ligase, c'etait ca la reflexion. sachant qu'on a deja un controle plasmide sans ligase et plasmide + ligase, ce qui permettra, comme tu le dis, de verifier entre autre l'activite de la ligase mais surtout que le vecteur est bien digere.  [...]