• Santé - ADN, Extrémités, Libres, Fragment

[Biochimie] Correction de la réplication

En fait j'ai cru comprendre que l'ADN pol I avait une fonction exonucléasique 5',3'en vérifiant à chaque fois que l'appariemment entre les nucléotides était bon.Mais ensuite on nous a parlé d'une fonction exonucléasique(fonction d'édition) dans le sens inverse 3', 5' mais je ne sais pas trop quelle est l'enzyme qui réalise cette fonction.  [...] Une exonucléase ne peut couper l'adn qu au niveau des extremités libres alors qu une endonucléase peut couper au milieu d un fragment d'adn.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

pour le protocole de clonage, la première étape est la création d'une banque d'adn (extraction adn, digestion par une enzyme de restriction puis ligation de ces fragments dans des plasmides portant les sites de restrictions de l'enzyme restriction choisie).  [...] Ce sont les mêmes. Si vous souhaitez cloner dans le site BamHI d'un vecteur et que votre fragment d'ADN ne porte pas de site BamHI, vous allez créer des amorces PCR contenant NNNNNN-BamHI-extrémité5'dufragment et NNNNNN-BamHI-extrémité3'dufragment (antisens) Votre fragment amplifié sera NNNNNN-BamHI-fragment-BamHI-NNNNNN et vous pourrez générer votre fragment avec des extrémités BamHI libres qui pourront liguer avec celles de votre vecteur.  [...]

Définition | Oligonucléotide | Futura Santé

les oligonucléotides servent d'amorce pour amplifier un fragment d' ADN par la réaction de PCR. Pour cela, les oligonucléotides doivent être complémentaires d'une des extrémités du fragment d'ADN à amplifier.  [...] les oligonucléotides servent de sondes dans les expériences de Southern blot. par exemple, on peut utiliser des oligonucléotides marqués radioactivement avec du 32 P, et complémentaires d'une séquence d'ADN d'un gène d'intérêt. La sonde sert à isoler le gène recherché dans un mélange de fragments d'ADN.  [...]

Questions sur la réplication et la traduction

Le dernier. lors de la transcription de l'ADN en ARN, on peut observer une structure ressemblant à une feuille de fougère dans laquelle la branche principale est le gène et les branches latérales des molécules d'ARN en formation. Les extrémités libres de ces molécules d'ARN sont-elles des extrémités 3' ou des extrémités 5'.  [...] Mais je ne sais pas exactement quelle sera l'extrémité libre pour l'ARN. Quand on dit qu'on synthétise 5' =. 3', on veut dire qu'on ajoute un nucléotide à l'extrémité 3' ou à l'extrémité 5'.  [...]

[Génétique] Notion d'insert et de vecteur

Sinon brève explication. Un vecteur est souvent un fragment d'ADN circulaire, tel que le plasmide. L'insert est un fragment linéaire que tu veux insérer dans le vecteur. Pour cela il te faut ouvrir le vecteur. On prend une enzyme de restriction car elle coupe en laissant de part et d'autre de la coupure des bouts collants car une partie de ces bouts est simple brin et peut donc s'apparier avec un autre fragment simple brin de séquence complémentaire.  [...] En générant les même extrémités au niveau de l'insert, celui ci pourra s'apparier avec les extrémités du vecteur car si tu remarques ce sont des séquences dites palindromiques. la moitié 5' de la séquence est complémentaire de la moitié 3'. Une fois collé, on reconstitue un fragment d'ADN circulaire avec l'insert inséré.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation

est- ce - que tu as procédé à une déphosphorylation de l'extrémité 5' de ton plasmide digérée l'utilisation d'une phosphatase alcaline est necéssaire dans l'étape qui précède la ligation puisque tu utilises un seul enzyme de restriction... car au moment de ligation il va être plus facile à un plasmide de se recirculariser plutôt qu'intégrer une autre séquence.  [...] Refait le clonage à partir de ton fragment sorti de PCRTopo mais sans déphosphorylé ton plasmide. La CIP ou la shkink abime parfois les extrémités de l'ADN rendant impossible toute ligation.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

Oui c'est possible, à condition d'insérer un fragment d'ADN à extrémités cohésives.  [...] sinon on peu toujours remplir ou grignoter les extremités ce qui les rends franches et permet le clonage de n'importe quoi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Voilà, je n'ai pas compris la correction d'un TD à propos de la PCR. Par le fait que l'on utilise des amorces oligonucléotidiques de synthèse, il est possible d'ajouter des séquences dans la région 5' de chaque amorce. Par exemple, un site de restriction aux 2 extrémités du fragment d'ADN synthétisé permettrons ultérieurement d'assembler le produit PCR dans un plasmide.  [...] Au cycle suivant, l'amorce (antisens cette fois) va s'hybrider sur ce nouveau brin, complémentaire et antiparallèle du brin matrice. L'élongation permettra de produire un brin complémentaire a ce nouveau brin, jusqu'a son extrêmité 3' qui contient le site de restriction.  [...]

les séquences

Heu oui tu as raison, ce n'est pas de l'ARN qui est synthétisé, mais de l'ADN. Il y a donc 2 brins fille qui sont synthétisés ou un seul Car dans le cas de 2, je ne sais pas trop comment placer le 2ème, il n'y a pas toujours 2 extrémités 3'OH libres sur chaque brin.  [...] Ce que je ne comprends pas dans le coup de l'extrémité OH libre, c'est que de toutes façons, pour qu'elle puisse polymériser, il faut qu'une hélicase (ou une activité hélicase lui appartenant) lui ouvre l'hélice. donc, si les deux brins sont déshybridés, il y a forcément une extémité OH libre sur lequel elle puisse commencer, non.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nombre d'enlacement

Qui peut m'expliquer cette phrase lue dans un bouquin de biologie moléculaire. le nombre d'enlacement est toujours constant quelles que soient les déformations que l'on fasse subir à un ADN dont les extrémités sont fixes...merci bien.  [...] En effet, c'est à peut près cela. c'est un problème que les ADN circulaire des bactéries rencontrent (les deux extrémités sont fixées l'une à l'autre, cela revient au même. elles ne sont pas libres). De fait, si tu tentes de dérouler l'ADN, un phénomène appelé supercoiling apparaît.  [...]