• Santé - ADN, Enzymes, Séquence

ADN de séquence inconnue, choix des enzymes de restriction.

Supposons que l'on veuille insérer un brin d'ADN de séquence inconnue dans un vecteur, comment fait-on pour choisir les enzymes de restriction idoines pour couper ce brin d'ADN au bon endroit (c'est à dire à ces deux extrémités, pour pouvoir cloner le brin d'ADN dans son intégralité).  [...] Grosso modo, vous avez un fragment d'ADN que vous souhaitez faire rentrer dans un plasmide. Vous ne savez pas comment il a été obtenu, vous ne connaissez pas son état. Pour le faire entrer dans un plasmide, il va vous falloir ouvrir le plasmide en utilisant une enzyme de restriction dont il existe deux types.  [...]

Intégration dans un plasmide

L'intégration de séquence d'intéret ( un ou plusieurs gènes ) se fait par technique d'ADN recombinant. En gros, tu vas utiliser des endonucléases ( ou enzymes de restriction) qui font créer des extrémitées cohésives ( pouvant être ligasé par une ADN ligase ) sur ta séquence d'intérêt et sur ton vecteur plasmidique.  [...] Une fois que tu as digéré avec tes endonucléases, tu peux procéder à la ligation de ton vecteur (le plasmide) et de ton insert (ta séquence).  [...]

Solénoïde

SVP qql pourrait m'expliquer qu'est ce qu'un Solénoïde.   [...] Quand à ton autre question elle est un peu vague. Mais quand on parle de clivage on parle de coupure. Ça peut être un clivage sur un seul brin d'ADN ou bien sur les 2 brins à la fois. Ces clivages se font via des enzymes qui vont cliver spécifiquement (sur des sites particuliers de la séquence d'ADN) ou non (aléatoirement la séquence d'ADN).  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

est-ce que je dois essayer de trouver les sites de restriction des enzymes des vecteurs dans la sequences du ARNm et choisir le vecteur qui contient le plus d'enzymes dont les sites de restriction on ete trouve dans l'ARNm.  [...] vous pouvez utilisez 2 enzymes de restrictions aussi..mais cette fois vous allez remplacer une séquence du vecteur (elle va être coupée par 2 enzymes différents, chaqu'un d'un coté )par votre séquence d'ADN (qui va être aussi coupée par lé deux)...P.  [...]

[Génétique] Génome Bactérien

Quels sont les gènes remarquables dans le génome bactérien.   [...] Tous dépend de ce que tu veux dire par remarquables, si tu veux dire par là les gènes communs à toutes les bactéries, je dirai. la séquence ori, la séquence ter, les séquences d'ADN qui code pour la protéine DnaA (protéine initiatrice de la réplication), toutes les enzymes impliquées dans la réplication, la transcription et la traduction de l'ADN.  [...]

amplification de l'ADN

koi ke je dois prendre comme enzymes y a t-il des sequences de nucleotides specifiques et necessaires a incorporer pour rendre le 'raccord' en ancien ADN et chaines nouvelles.  [...] Il me semble que dans certaines conditions (Température, pH, enzymes...), les nucléotides se lient spontanément entre eux. Donc il est possible de fabriquer de courtes chaines d'ADN sans matrice de référence. Pour obtenir l'alignement souhaité on fait défiler dans la solution la séquence que l'on souhaite.  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

Certaines enzymes de restrictions ont des fréquences de coupures plus grandes suivant la complexité de la séquence reconnue.  [...] heu... ben southern blot c'est le nom de la methode. Le principe de la methode est d'hybrider une sequence d'ADN connue sur un pannel de sequence d'ADN inconnues (banque d'ADN, ADNg coupé par des enzymes de restriction, etc...) pour mettre en evidence la presence ou l'absence de la sequence connue.  [...]

enzymes qui génèrent des bouts collants

Bonjour à tous, est ce que quelqu'un pourrait m'expliquer la notion de bout collants générer par des enzymes Je sais que l'Enzyme BAM H1 reconnait 6 nucléotides. elle scanne la molécule d'ADN et quand elle reconnait la séquence d'ADN, elle se fixe dessus en clivant la liaison phosphodiester.  [...] Le nucléotide a deux extrémités - une 3' et une 5'. On se sert de cette orientation notamment pour définir le brin et l'anti-brin d'un allèle génétique.   [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Des PCR qui n'ont rien à voir ont été faites pour tester l'enzyme (Phusion), le tampon de l'enzyme, l'eau et les dNTP, tout a très bien fonctionné.  [...] Votre séquence est elle riche en GC, en structure secondaire car en plus de la taille de l'amplicon, cela peut aussi expliquer le fait que les enzymes décrochent de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] inverse PCR

Et on utilise pas de plasmide... Ce que tu peux confondre avec un plasmide n'est qu'une séquence d'ADN génomique qui s'est refermée sur elle-même... (une des étapes de l'inverse PCR).  [...] Inverse PCR. technique qui utilise des enzymes de restriction et des ligases afin de pouvoir réaliser une PCR sur un fragment d'ADN dont la séquence est en grande partie inconnue.  [...]