• Santé - ADN, Enzyme, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

les enzymes de restrictions sont utiliser, comme des ciseaux pour couper cette molecule et y coller le gène que tu veux exprimer.  [...] que du clone recombinant sous l'action de l'enzyme approprié tu trouves 2 fragments d'ADN ton plasmide+insert.  [...]

[L1 BIO] TP Biologie moléculaire

Dans le tp on nous donne un plasmide recombinant,un avec une séquence d'ADN qu'on appelle Dsred,l'autre GFP.Le but est de le différencier par différent moyen PCR,digestion enzymatique et électrophorèse.  [...] Non. Il n'y a aucune enzyme dans un plasmide (elle se cacherait où, entre les deux brins d'ADN ), il n'y en a pas non plus dans le tube contenant le plasmide, sinon il serait déjà digéré. Il n'y a pas non plus la séquence codant pour l'enzyme.  [...]

[Génétique] Intégration ADNc

Les enzymes de restriction coupent des sites spécifiques, en laissant des sites coupés spécifiques de chaque enzyme. Si les sites sont semblables, il peut donc y avoir jonction. C'est comme cela qu'on insère un gène.  [...] Maintenant si tu coupes les deux bouts avec la même enzyme, tu auras des deux côtés les mêmes sites donc ton brin pourra s'insérer dans n'importe quel sens. En coupant avec deux enzymes, on a un site spécifique pour chacun des bouts, on peut donc décider dans quel sens sera intégré le morceau d'ADN dans le plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide ligature

ce qui m'étonne c'est que tu coupe ton ADN avec une enzyme et ton plasmide avec une autre. Normalement les bouts collants ne peuvent pas se linéariser comme cela.  [...] Maintenant la ligation est peut être réalisée en bout franc et donc ne tient pas compte des digestions qui ne servent qu'a définir l'emplacement. Dés lors on ne pourra pas redigérer le plasmide reformé avec les mêmes enzymes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

- bruit de fond dû à l'ADN non digéré ou digéré par une seule enzyme. nombre de colonies / µg d'ADN de plasmide digéré incubé avec la ligase.  [...] Pour l'instant, nous n'avons aucun moyen de contrôler que nos colonies aient bien pris le vecteur + l'insert. C'est un tp en plusieurs séances, le tp de lundi prochain a pour but de vérifier le clonage en purifiant les ADN plasmidiques puis on fera des digestions enzymatiques contrôles.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

j'ai du mal à comprendre une notion de mon cours malgré les explications de ma prof. pourquoi l'ADN du plasmide et celui de l'organisme dont on veut cloner le géne sont-ils découpés avec la même enzyme de restriction.  [...] -soit on rajoute du BET dans la digestion. il va s'intercaller a la premiere coupure et empechera l'enzyme de recouper. Mais c'est vrai pour les plasmides je n'ai jamais essayé pour de l'ADNg.  [...]

[Génétique] plasmide ADN distinct de l'ADN chromosomique

j'ai pas bien compris la définition du plasmide,surtout quand ils disent que c'est une molécule d' ADN distinct de l'ADN chromosomique.  [...] La principale différence entre le chromosome et le plasmide est que le chromosome porte les gènes essentiels pour la survie de la cellule, alors que les plasmides ne sont pas indispensables. Ils permettent surtout à la cellule de mieux s'adapter à son environnement, et on y trouve généralement des gènes de résistance à des antibiotiques, ou des gènes impliqués dans le pouvoir pathogène de la cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Faire du pGEMT soi-meme

Pour ma part je partirais sur une strategie differente. Tu peux faire une amplification lineaire (50 a 100 cycles avec une enzyme HF et tres thermostable) d'un plasmide avec une amorce contenant un T sortant. En 2 PCR tu as assez d'ADN simple brin pour reformer une grosse quantitee de vecteur.  [...] Avec 50 a 100 cycles, le rendement PCR lineaire est pas trop mauvais. En partant d'une dizaine de ng de plasmide tu arrives a pas loin de 1ug (en theorie).  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment choisir les enzymes de restrictions pour un clonage?

Je suis étudiante en L3 de bio. J'ai un exercice de biologie moléculaire à faire et je bloque sur le choix des enzymes de restriction.  [...] J'ai joins le fichier de mon exercice. Comment choisir les bonnes enzymes Doivent-elles être présentes sur le MCS du plasmide et absentes de l'adn du STAT5B.  [...]

[Génétique] Tale nuclease

Bonjour, je voudrais savoir svp si quelqu'un aurais déjà entendu parler des TALENS ces des enzymes artificielles qui provoquent des cassures double brin de l'ADN je souhaite savoir si en les transfectant grce à un plasmide dans une cellules eucaryotes il faut que ce gène s'intègre a l'ADN de la cellules eucaryotes ou une simple expression transitoire suffit, Merci bcp d'avance.  [...]