• Santé - ADN, Digestion, Enzyme

[Microbiologie] Hybridation

Coucou tous le monde, au fait je vais faire de l'hybridation avec une sonde 16s et une sonde d'un gene de résistance,pour voir si le gene est chromosomique ou non, (puisque le 16s est du chromosome),pour la digestion donc j'ai utilisé l'enzyme. Iceu-1 (qui coupe l'adn) mais lors de la migration.  [...] Non, cette enzyme a tendance à rester accrocher à son site de coupure. Le SDS va dénaturer l'enzyme, qui va donc se décrocher. Il faut donc l'ajouter après la digestion et avant la migration de l'ADN.  [...]

plamide repris en EDTA et digetion enzymatique

J'ai extrait un plasmide que j'ai repris dans du tris-EDTA. Ensuite, j'ai digéré celui-ci par une enzyme de restriction mais mon ADN est complètement dégradé. Après avoir fait des tests, des vérifs et de la lecture, il s'avère qu'il ne faut pas de présence d'EDTA pour une digestion enzymatique.  [...] J'ai fait un test. j'ai refait une digestion avec le plasmide repris en EDTA mais je n'ai pas mis d'enzyme. Résultat. mon ADN est dégradé par le tampon, je l'ai fait avec les kits de deux fournisseurs. Il ne s'agit donc pas d'activité STAR, car il n'y pas d'enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

J'ai un problème avec une digestion d'ADN amplifiés par PCR par l'enzyme de restriction Mnl1, une bande supplémentaire que je n'attendais pas apparaît, alors que ma PCR est spécifique et n'est pas contaminée. Mes réactifs de digestion non plus ne sont pas contaminés, j'ai vérifié avec le blanc de PCR.  [...] Cet effet Star n'est pas connu pour l'enzyme Mnl1, mais j'ai constaté que le fournisseur avait récemment changé de tampon de réaction pour cette enzyme, et moi j'ai utilisé l'ancien, ça a peut-être un lien...en tout cas, merci de vos réponses.  [...]

[Biologie Moléculaire] technique d'hybridation moléculaire

Lors de la conjugaison entre deux bactéries, il se peut que si la partie du génome viral de la cellule donneuse qui ai été transféré dans la cellule receveuse possède des sites de liaisons à l'ADN de cette dernière, les deux séquences d'ADN s'échangent. L'ADN viral de la bactérie receveuse qui ne se trouve plus sur le génome de celle-ci va être vite dégradé.  [...] .En fait y'a pas eu de conjugaison,j'ai réalisé une digestion d'ADN avec cette enzyme et une migration PFGE,ensuite j'ai hybridé mes fragments avec les sondes.  [...]

[Biochimie] Fonction de la protéine A-Sepharose ?

De l'ADN extrait de cellules humaines en culture ( cellules Hela ) a été purifié puis digéré par une enzyme de restriction (digestion totale),. aprés la digestion, les fragments sont marqués en 5'. une partie de la préparation est conservée à 4°C, l'autre partie est incubée successivement en présence de protéine p53, d'anticorps anti-p53, puis de protéine A-Sepharose.  [...] aprés toutes ces incubations, centrifugation, puis extraction de l'adn du culot, les deux essai (partie 1 et 2 ) sont analysés par électrophorése et autoradio.  [...]

[Biologie Moléculaire] La carte de restriction

disons que nous avons une molécule de l'ADN linéaire de 15 kpb la digestion de celui-ci par trois enzymes nous donne quelque chose comme ça.  [...] Si ton ADN est linéaire et que la digestion par une enzyme (exemple Bam HI) génère deux fragments (de 14 et 1 kpb), ça veut dire qu'il n'y a qu'un seul site pour cette enzyme =) comme un fil qu'on coupe en deux une seule fois. on se retrouve avec deux morceaux.  [...]

carte de restriction

je ne comprends pas comment l'établir à partir de l'electrophorése d'adn digéré par une ou plusieurs enzymes de restriction.  [...] Commence par établir le nombre de site pour une enzyme en fonction du nombre de brin après digestion. Regarde aussi la taille de ton ADN et place un des site au nucléotide +1.  [...]

[Biologie Moléculaire] révélation RFLP

concernant l'utilisation des RFLP dans le diagnostic génotypique cette methode necessite le couple sonde/ enzyme de restriction, cela réfère a la technique southern blot, mais cette technique est très lourde. est ce qu'il ya un autre moyen pour rééler les RFLP.  [...] SI c'est une simple RFLP, je ne vois pas l'intérêt de la sonde. Une fois la digestion par l'enzyme effectuée, une simple migration sur gel d'agarose avec un argent marquant l'ADN devrait suffire à visualiser les fragments et à donner une bonne idée de leur taille.  [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

digestion de restriction. certaines protéines sont capables de couper l'ADN à des endroits bien précis (par exemple. gaa. ttc). Ce sont les enzymes de restriction. Dès que l'enzyme trouve son site, elle coupe l'ADN comme tu couperais un bout de ficelle avec un ciseau.  [...] Le résultat de la digestion avec l'enzyme 2 t'indique qu'elle coupe le plasmide 1 fois mais tu ne peux pas placer son site par rapport aux sites E1.  [...]

[Biologie Moléculaire] précipitation de l'ADN diminution de la taille de mon fragment!!!

je digère un vecteur d'environ 6000pb avec une enzyme de restriction qui coupe une seule fois dans ce vecteur. je vérifie ma digestion sur gel d'agarose...une belle bande à 6000pb. je décide de précipiter (avec de l'éthanol) l'ADN sur la nuit. le lendemain, je re-dépose sur gel.  [...] Serait-il possible que ton endonucléase de restriction ait une activité qui puisse être modifiée en présence de fortes teneurs en éthanol (admettons une gène sur le site de reconnaissance) entraînant un mésappariement et la catalyse d'une coupure non spécifique.   [...]