• Santé - ADN, Contrôle, Positif

[Biologie Moléculaire] Est-il possible d'effectuer une PCR directement à partir d'ARN ?

Dans le cas d'une RTPCR, à quoi sert le controle positif ARN ( contamination par ADN.  [...] Oui c'est le but du controle positif, on fait une PCR sur le tube avant la RT, ainsi si y a ampli c'est qu'il y a de l'ADN dans ton échantillon.  [...]

[Biochimie] contrôle interne pcr

Dans la colonne du contrôle positif, j'ai deux bandes. celle du contrôle interne (157 bp) et celle du contrôle positif(284 bp ). C'est là que je comprends pas bien, est ce que le gène (inv A) des salmonnelles a la même taille que la séquence de l'adn du contrôle positif reconnue par les primers.  [...] Car pour que la portion d'ADN recherchée soit amplifiée, il faut que ses extrémités soient complémentaires des primers. La bande de l'adn du contrôle positif doit être au même niveau que celle représentant le gène recherché sur le gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage dans le pGEM-T easy vector.

Encore une petite chose par rapport à l'Arc qui est arrivé lors de l'électroporation. Le background control de promega était ok, pas d'Arc. Par contre, LEUR contrôle positif avec les 2 ul de leur ADN à insérer m'a donné un Arc. Je ne comprends pas pourquoi vu que j'ai juste suivi le protocole.  [...] J'ai purifié ma ligation des éventuels sels présents et j'ai refait l'électroporation et de nouveau Arc. Ce n'est que lorsque j'ai dilué 100 x le contrôle positif que je n'ai plus eu d'Arc. Il semblerait que ça soit un problème de concentration d'ADN... Mais comment leur contrôle positif pourrait être trop concentré.  [...]

[Biochimie] Marquage TUNEL!

Elle permet le marquage radioactif des UTP qui vont se fixer en 5' de l'ADN clivé en de très nombreux points par les nucléases. Ce processus est amplifié en cas d'apoptose, on aura beaucoup d'extrémités d'ADN. Donc plus le marquage tunel est important plus on aura d'apoptose.  [...] 1) on marque les extrémités des ADN, produites par clivage lors de l'apoptose. La DNAse sert en général de contrôle positif, pour générer des fragments d'ADN qui seront donc marqués.  [...]

[Biologie Moléculaire] Identification d'un gène déterminé

Maintenant j'ai une bactérie 2. Je veux savoir si cette bactérie a aussi cette résistance ci. Je veux le montrer à l'aide d'un PCR puis gèle éléctroporèse. Est-ce possible (j'imagine que oui, sinon comment faut-il faire ).   [...] On fait une PCR sur l'ADN de la bactérie 2 (en contrôle positif on met l'ADN de la bactérie 1 bien sur).  [...]

[Biologie Moléculaire] Témoins positifs et négatifs PCR

Cela permettra de voir si un de tes composants est contaminé avec un ADN qui peut produire du signal, du coup si tu as un signal dans ton contrôle négatif, tu ne sauras pas si le signal obtenu dans tes échantillons est spécifique ou lié à une contamination (permet donc d'éviter les FAUX POSITIFS).  [...] Le contôle positif le plus courant est d'ajouter un fragment d'ADN connu dont tu es sur qu'il produira le signal attendu. De la même manière, si tu n'as pas de signal dans ton contrôle positif tu ne sauras pas si tes échantillons sont négatifs ou si l'amplification n'a pas fonctionné (permet donc d'éviter les FAUX NEGATIFS).  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR: dépôts qui restent dans les puits lors de la migration

Le problème que j'ai est que je ne parviens pas à obtenir de bande à découper sur mes gels (1% agarose dans TAE). mes dépots semblent rester dans les puits, quelque soit la condition considérée.   [...] Piste 3. Controle positif (50ng du plasmide contenant le gène wt). On y devine bien une bande au bon PM, mais celle-ci reste bien trop faible pour être purifiée (et le but est de purifier la bande pour l'ADN patient).  [...]

[Biologie Moléculaire] contrôle positif PCR

je suis assistante ingénieur dans un laboratoire d recherche. j'ai un petit problème avec les contrôles positifs pour mes PCR. juste après quelque semaine, (si j'ai de la chance) la bande est très faible, mais il m'arrive de la perdre complètement.  [...] c'est de l'adn, genotypage à partir de bout de queue de souris. programme classique d'une PCr, on veut juste reconnaitre les animaux hétérozygotes (deux bandes) des wt (1 bande). C'est assez simple, mon contrôle positif doit avoir deux bande, mais souvent ça marche une seule fois et la semaine d'après les bandes ont disparu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

Ce type de quantification peut par exemple être utilisée en R&D pour comparer l'expression d'un gène après traitement par une drogue vs un contrôle sans drogue. On obtient alors plus une amplitude qu'une quantité.  [...] L'utilisation en PCR des séquences ITS (ADN) dites universelles ont la même utilité que les séquences 18S (ARN) en RT-PCR, à savoir valider la présence d'ADN dans ton échantillon, leur qualité, et éventuellement normaliser tes dépôts. C'est un contrôle positif.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rt-pcr

Ton prof voulait probablement dire qu'a l'issue d'une reverse-transcription (RT) suivie de PCR. si le résultat est négatif, a priori c'est qu'il n'y a pas d'ARN et il est positif que s'il y en a (sous réserve d'un contrôle ou l'on amplifie l'échantillon sans passer par RT, pour vérifier l'absence d'ADN dans la préparation avant la RT).  [...] Pour résumer, tu peux utiliser la RT-PCR pour détecter indirectement la présence d'un ARN. Attention toutefois, tu ne peux conclure a l'absence de ton messager qu'en ayant fait un contrôle positif te permettant de discriminer entre l'absence de messager et le non fonctionnement de l'expérience.  [...]