• Forum - Western, Anticorps, Couple

[Biologie Moléculaire] Surface biotinylation

La biotine aussi connue sous le nom de vitamine H ou B8 est un coenzyme qui participe au métabolisme des acides gras, des glucides et des acides aminés et à la synthèse des vitamines B9 et B12.   [...] Le seul moment ou on peut utiliser la biotine lors d'un western est au moment de l'hybridation avec les anticorps. On incube les membranes avec un anticorps secondaire couplé à la biotine. La biotine ayant une affinité très forte avec la streptavidine ou l'avidité, on peut révéler le western avec une enzyme couplée à la streptavidine.  [...]

[Biochimie] Bsa

Immunochimiluminescence est un terme qu'on utilise pas très souvent (souvent pour faire joli ^^). Lorsqu'on fait un western blot ou un ELISA en utilisant des anticorps couplés à la peroxydase, c'est de l'immunochimiluminescence. Immuno parce qu'on utilise des anticorps, et chimiluminescence parce que l'anticorps est couplé à une enzyme (généralement une peroxydase) qui va transformer son substrat en une molécule qui va produire de la lumière.  [...] En analyse médicale, on utilise aussi des billes sur lesquelles sont greffés les anticorps. On utilise juste un autre support pour faire le dosage et comme c'est pas un ELISA, là on est bien obligé de garder le nom immunochimiluminescence (souvent abrégée en IC).  [...]

Immunohisto

L'anticorps peut +/- bien marcher en western-blot par rapport a l'immunohisto (ou cyto-)-chimie. Les tampons sont differents, les conditions aussi...l'interaction epitope-site anticorps etant conditionne grandement par des interactions ioniques-electrostatiques, les tampon, pH, ions (...) jouent pas mal.  [...] Comment expliquer que mon anticorps (spécifique de l'état phosphorylé d'une protéine) se fixe sur le tissu cérébral dans une structure Y (donc il marche.), mais pas dans la structure X (y a rien du tout de marquer.) où l'on observe du marquage en western avec le même anticorps.  [...]

Différence de fixation des cellules

Il n'y a pour ainsi dire jamais de controle en cytoimmuno ou en histoimmuno. Du coup, avec un anticorps commercial vous n'êtes jamais vraiment certain que votre manip va bien fonctionner comme vous le voudriez. C'est un premier point.  [...] Non là je ne suis pas tout à fait d'accord. La plupart des anticorps sont destinés et testé pour un usage particulier. Rien que chez Cell Signaling pour ne pas la citer, les anticorps sont validés pour une ou plusieurs manipe définit (western, If, immunohistochimie, immunoprécipitation,  [...]

[Divers] microbiologie, immunologie, biochimie.....

Les antigènes sont simples à purifier, tant qu'on a à disposition le matériel nécessaire. En effet ils sont spécifiquement couplables à des anticorps. Donc on entend chromatographie d'affinité. On entend western blot si ce sont des protéines. On entend tout ce qui fait intervenir des réactions entre ligands.  [...] Seul un anticorps présente une spécificité de reconnaissance d' un [ site /motif] antigénique donné. Spécificité qui s'exprime au travers de la reconnaissance paratope(Ig)-épitope(Ag). Parce qu'exactement ce n'est pas l'antigène en entier que reconnais un anticorps (juste l'épitope).  [...]

Problème RT-PCR sur cDNA

Une autre possibilité. un Western Blot avec un anticorps specifique du peptide que donnerait cet intron s'il était traduit. Si le Western est positif alors tu auras prouvé que cet intron est inclus et tu pourrais même estimer la quantité avec un anticorps contrôle spécifique d'une autre partie de ta protéine.  [...] L'idée du western est pas mal du tout sur le papier, mais faire l'anticorps monoclonal n'est pas si simple.  [...]

[Biologie Moléculaire] Anticorps GLUT2 pour Western Blot

J'aimerais avoir votre avis sur un petit problème que je rencontre actuellement au laboratoire. Voila je fais des Western Blot depuis un bon moment mais impossible de trouver un anticorps GLUT2 assez potable. En effet beaucoup me donne des bandes non spécifiques.  [...] J'aimerais donc savoir si vous connaissez des anticorps qui peuvent donner un signal assez correct. Je travail sur du foie (pour petite information). Merci.  [...]

Problème de WB, HRP sensible à la lumière ?

- vérifie tous tes produits (fabrication des gels, des différentes solutions genre celles que tu utilises pour diluer tes anticorps). Si tu as le moindre doute sur un produit (date de péremption, conservation à la mauvaise température, cpontamination,...).  [...] - demande-toi si les problèmes n'ont pas commencé au moment où tu as commencé un nouveau tube d'anticorps (si plusieurs types de western blot posent problème, utilisent-ils tous le même AC secondaire). Si tu as changé de tube d'anticorps, s'agit-il du même lot et de la même date de fabrication que l'ancien.  [...]

[Biochimie] Etude de la phosphorylation d'une protéine

En fait je pensais aussi faire un western sur ton gel avec des anticorps anti-Ser/Thr/Tyr phorsphorylées et anti- ta-protéine. Je n'ai jamais fait de 2D mais je sais que ça se fait. Et puis pour les grosses protéines ont peut aussi faire des gels d'agarose, au moins pour la première dimension.  [...] Heureusement cette protéine est couplée à l'EGFP, j'ai donc pu mettre au point une immunoprécipitation pour la séparer des autres protéines cellulaire sur SDS-PAGE. En parallèle je réalise un blot avec l'anticorps dirigé contre la protéine virale. Ensuite je découpe sur mon gel coloré au nitrate d'argent la bande immunoprécipitée correspondant à ma protéine.  [...]

[Biologie Cellulaire] Qui à déjà utilisé le système SNAP i.d. de Millipore pour ses Western Blot?

C'est seulement lorsqu'un anticorps est déjà un peu limite en western normal que là le SNAPid risque de donner un résultat encore plus moche en terme de spécificité. Mais c'est rare.  [...] .. évidemment) mais on eput les réutiliser 4 fois pour un anticorps donné... je pense que je vais le tester dans un labo ici qui l'utilise, je vous dirai ce que j'en pense.  [...]