• Forum - Volume, Bactéries, Glycérol

[Microbiologie] conservation bactéries chimiocompétentes

Jai 0,8 ml de solution bactérienne et du glycérol à 40 %. Dans un cahier de labo de mon ancienne collègue, il est noté 0,8 ml de solution bactérienne + 0,7 ml de glycérol 40%. Je ne comprends pas le calcul. Pouvez-vous m'aider merci beaucoup.  [...] Ce que vous voulez faire, c'est diluer d'un facteur 2 le glycérol. Il faut donc mettre 1 volume de bactéries avec 1 volume de glycérol 40%/.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

voilà j'explique mon soucis, j'ai crée des bactéries contenant des constructions plasmidiques, j'ai fait des minipreps pour faire le sequençage, et congelé le reste pour stocker dans du glycerol à 75%.  [...] Le Glycérol c'est pas le top pour les cellules en général. Quand je congèle mes bactéries après miniprep la concentration finale en Glycérol est de 10% et je n'ai jamais eu aucun problème pour les faire repartir même en grattant un peu pour une midiprep de 200ml.  [...]

[Microbiologie] Lactobacilles

30 min à 5000g et resuspendre le culot dans du glycérol 40% stérile et stocker tes bactéries à -80°C. Dès que tu en auras besoin tu n'auras qu'à dégeler rapidement ce stock afin d'ensemencer tes milieux.  [...] Dans un congélateur classique à -20°C, la durée de vie des bactéries sera réduite, de plus je ne suis pas sur que le glycérol se congèle à cette température.  [...]

Solutions à ne pas autoclaver !!!

Mais je me demande pourquoi on ne peut pas autoclaver les détergents, glucose, glycérol et surtout les acides (parce que les bactéries ne poussent pas dans un milieu acide et pour les bactéries acidophiles.  [...] Mais je me demande pourquoi on ne pas autoclaver les détergents, le glucode, le glycérol et surtout les acides.. parce que les bactéries ne poussent pas dans un milieu acide et pour les bactéries acidophiles qui aiment l'acide.  [...]

milieu de conservation -80°C Légionelles

Je pense qu'un milieu classique de conservation de bactéries devrait suffire. Ils sont à base de glycérol, mais je ne connais pas la composition exacte.  [...] On conserve en général les bactéries à -80°C dans leur milieu de culture standart dans lequel on ajoute 20% de glycérol stérile.  [...]

Carte de restriction d'un plasmide inconnu

Le deuxième problème est la concentration en glycerol. Généralement, les enzymes sont suspendu dans un tampon coupé à 50% de glycerol, afin d'éviter les cycles de congélation/décongélation, qui abimeraient l'enzyme. Cependant, le glycerol est très mauvais pour l'activité de l'enzyme, et communément, ont admet que la quantité d'enzyme (+glycérol) ne dois pas dépasser 10% du volume total de digestion.  [...] Elle ne coupe pas quand il y a méthylation et donc si tu ADN est très méthyler tu peux avoir des problèmes de coupure. Quand on l'utilise pour le clonage dans des bactéries ont utilise des bactéries dites dam- qui ne méthylent pas.  [...]

[Biochimie] Mutagénèse dirigée

D'apres ce que tu as décris, il me semble que tu essayes de transformer les bactéries avec seulement le produit de PCR et que tu ne mets pas le plasmide. Ce dernier, qui doit surement contenir un gène de résistance aux antibiotiques, ne peut donc pas empêcher les bactéries de mourir au contact du milieu LB+ampicilline.  [...] Néanmoins, ce genre de problème m'était arrivé une fois et cela avait été résolu en augmentant la quantité de produit pour transformer les bactéries. Donc ça peut vraiment être une solution.  [...]

[Microbiologie] culture de bactéries conservées

Voila j'ai quelques espèces de bactéries conservées dans du glycerol, et j'aimerai procéder a une reculture sur boite de pétrie, quelle est la démarche à suivre.  [...] Le mieux est de faire une pré-culture, c'est à dire un ensemencement dans un petit volume (environ 5-10 ml de milieu), le temps que les bactéries récupèrent. Puis à partir de cette pré-culture vous pouvez ensemencez une boite de Petri.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole digestion

derniere chose, n'oublie pas qu'il ne faut pas depasser 10% de ton volume total en enzyme de restriction. Sinon le glycerol qu'elles contiennent fini par totalement perturbé ta digestion (inhibition, activité star etc...).  [...] Le top pour la digestion (selon protocole promega/ NE Biolabs, teste et approuve par tout le labo) C'est 50 uL volume final (ADN purifie, pas tout juste sorti de PCR), et max 2 uL d'enzyme. Un volume plus petit ca coupe mal, et plus d'enzyme au mieux ca change rien, au pire ca coupe mal ou avec activite star.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification et purification de plasmide

- La conservation de bactéries transformées dans 25% final de glycérol à -80°C vous semble t'il être un bon moyen de conservation.  [...] Les culots de bactéries je les trouve pas énormes mais j'ai peur de saturer les colonnes de purif avec trop de bactéries si je dilue moins la préculture, ou trop de plasmides en utilisant du chloramphénicol. Je vais refaire la manip cette semaine en eluant avec un plus grand volume d'eau et en précipitant à la fin pour reconcentrer mon plasmide et je verrai bien si j'en ai plus cette fois.  [...]