• Forum - Vecteur, Protéine, Bactérie, ARN

[Biologie Cellulaire] Vecteur d’expression dans une bactérie

-Je voudrai savoir si lorsque l'on introduit un vecteur contenant l'adnc d'une protéine eucaryote dans une bactérie on est obligé de mettre une queux poly T sachant que les Arn procaryote non pas de queux poly A.  [...] En revanche, je ne suis pas sure que même chez les Eucaryotes il y ait une vraie corrélation entre la présence de la queue polyA et la stabilité. il paraît que l'enlever diminue la durée de vie chez certains ARNm, mais ce n'est pas systématique.   [...]

Il y a t'il de l'ADN animal dans les excréments humains ?

Est-ce que cette bactérie peut échanger de l'ADN avec d'autres bactéries contenues dans le tube digestif ça me semble a priori possible. Par contre une bactérie doit avoir du mal à intégrer de l'ADN humain.  [...] Je parle de probabilité très faible car ceci peut aussi se produire avec des aliments non OGM, que la dangerosité dépend éventuellement du type d'OGM, du système immunitaire de la personne concernée, de la présence d'un vecteur bactérien/viral qui ferait intermédiaire, de l'endroit où s'insère le gène, de la capacité de l'ARN issu de ce gène à ne pas être détruit immédiatement / idem pour la protéine qui pourrait en être issue,  [...]

Intégration dans un plasmide

Je ne pense pas qu'il soit possible d'insérer dans une bactérie hôte un ARN linéaire, sauf si on utilise un phage comme vecteur. Dans ce cas si, tes rendements sont drastiquement augmentés car la transformation de bactérie compétente est relativement peu rentable.  [...] Les bactériophages (utilisés en tant que vecteur) infectant les bactéries sont eux, par opposition, vraiment plus efficace. Mais dans ce cas ci, les objectifs de ta manipulation sont autres que le simple fait de vouloir faire exprimer un gène par une bactérie.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

j'essaye de resoudre un petit probleme dans lequel j'ai un ARNm qui code pour une proteine. Je dois choisir un vecteur pour pouvoir reproduire cette proteine dans une bacterie.  [...] Pour ce qui est finalement du choix du vecteur, il te faut un vecteur contenant une origine de réplication procaryote, un gène de résistance à un antibiotique et pourquoi pas le gène beta-galactosidase à cheval du polylinker (cela permet de sélectionner les bactéries qui ont un plasmide ayant intégré un insert), et bien sûr le polylinker.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

petit détail, la sélection des bactéries par l'ampicilline sert à savoir si la bactérie possède le plasmide, mais cela ne donne pas d'indication si le gène codant la protéine a bien été inséré dans ce vecteur.  [...] Ensuite il faut insérer tout les plasmides dans une bactérie lambda, effectuer une transformation bactérienne pour rendre la protéine native inefficace. Puis la bactérie portant le bon plasmide est sélectionnée parmi toutes les autres sur un milieu nécessitant la protéine d'intérêt (or le gène natif ayant été muté, la protéine ne pourra provenir que du plasmide).  [...]

Expression de protéines

J'ai fait une expression de protéine taguée Histidine contenue dans un vecteur d'expression pTrcHis2B (protéine de Plasmodium falciparum ) dans des bactéries d'expression Rosetta 2, seulement lors de l'extraction de cette protéine puis dépôt sur gel j'ai 2 tailles différentes de cette même protéine.  [...] Si tu es certain que les deux bandes correspondent à ta protéine (la mass spec est de loin la méthode la plus fiable, bien plus qu'un WB), tu as probablement eu une protéolyse spontanée. Il faudrait savoir si ta bande de plus haut poids correspond à la masse attendue pour ta protéine, auquel cas tu aurais de la protéine intacte en fraction soluble et de la protéine clivée en fraction insoluble.  [...]

[Génétique] Conséquence de l'intégration d'un vecteur dans une bactérie

Le problème c'est que notre prof nous a dit que la réponse ne se trouvait pas dans l'ampiciline, mais au fait que l'intégration que ce vecteur permet la production d'une protéine.  [...] Oui c'est ça que je voulais qu'elle comprenne toute seule. si elle a plus de boulot à faire que les autres du TP elle mettra plus de temps -. la bactérie qui doit fabriquer le plasmide et synthétiser la protéine est ralentie dans sa multiplication.  [...]

[Génétique] Obtention de sonde plasmide

Bon tout d'abord désolée si je ne suis pas très claire, mais la génétique pour moi c'est un peu du chinois, alors merçi d'avance si quelqu'un arrive a m'éclairer.   [...] Le prof nous demande de simuler l'insertion dans un vecteur de clonage d'une sonde à partir de l'ARNm de la protéine.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Pour produire cette proteine de fusion dans les cellules de souris, il faut donc assembler un ADN recombinant puis de l'insérer dans un plasmide (ou vecteur ) d'expression permettant la transcription puis la traduction dans les cellules. Au préalable, afin de disposer de suffisamment de vecteur pour les cellules de souris, il est necessaire d'amplifier le vecteur dans le collibacille.  [...] On me demande de présenter les caractéristique generales de ce type de vecteur pour permettre son amplification dans le colibacille puis l'expression de notre proteine recombinante dans les cellules de souris.  [...]

ubiquitine et protéasome

Je t explique la manip. Enfait je suis entrain de créer le vecteur de clonage permettant de surexprimer la protéine permettant de capter une autre pour l'envoyer au protéasome. Est ce que tes inhibiteurs peuvent s utiliser sur des cellules S2+ Est ce que tu penses que si je transfecte ce vecteur dans ces cellules en presence d'inhibiteur et que je marque ma prot soit disant dégradée je pourrais par cette methode confirmer ou pas sa dégradation.  [...] Si tu mets un bloqueur il n'y aura pas dégradation. Si tu vois une accumulation avec ton vecteur et sans ton vecteur (toujours avec un bloqueur) c'est que ton vecteur ne joue pas de rôle dans la dégradation. Si tu veux voir l'ubiquitination de la protéine alor sil faut bloquer le protéasome, et tu peux utiliser la technique classique de purif (mais qui est pas évidente du tout et demande un paquet d emise au point).  [...]