• Forum - Vecteur, Expression, Stable

[Biologie Cellulaire] vecteurs

Une autre question les composants d'un vecteur qu'il soit a expression transitoire ou a expression stable sont-ils les mêmes.  [...] Oui, on retrouve tous ces éléments dans les deux types de vecteurs. Ce qui change, c'est la nature des signaux d'initiation de transcriptions (constitutifs ou inductibles) et, pour les vecteur d'expression transitoires, des gènes codant des répresseurs/inducteurs (voir le système tetON/ tetOFF).  [...]

Mammalian Expression Vectors

J'aimerai savoir si quelqu'un pouvait me conseiller un vecteur d'expression pour mammifère dans le but de sur-exprimer un gène de façon stable dans des cellules humaines. Un vecteur non inductible et taggé à l'eGFP ou à la luciférase serait le top. En effet, il en existe un grand nombre sur le marché et je ne sais lequel choisir.  [...] Remarque dans le sens de la question de J Luc. Il me semble que la cycline E intervient dans la régulation du cycle cellulaire... Donc l'exprimer (en plus sous le contrôle d'un promoteur fort) est pour moi assez difficile, je pense que les cellules qui vont exprimer cette prot vont être complètement dérégulées, ou il y aura une modification de l'expression de ta prot exogène pour minimiser son effet néfaste et tu ne sélectionneras que des clones qui l'exprimeront peu ou pas du tout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs intégratif+inductible

ce qui m'étonne un peu, c'est que souvent en transitoire, il y a plusieurs copie du vecteur par cellule, donc l'expression est plus forte qu'en stable. Dans mon cas, j'observais souvent une réduction de l'expression apres etre passé en stable.  [...] Ce que je ne comprends pas non plus, c'est que si c'est un vecteur inductible, normalement, il ne devrait pas y avoir d'expression en absence d'induction, et donc aucune raison qu'il y ait une sélection négative des transformants exprimant trop fortement, car la sélection se fait en absence d'induction.  [...]

[Biotechnologie] RNA interference : siRNA, shRNA

En effet le shRNA a besoin d'un promoteur et d'autres séquences pour s'exprimer (moins ready to use que le si). On peut effectivement l'intégrer dans un vecteur adénoviral (qui ne s'intègre pas. effet transitoire) ou lentiviral (qui s'intègre, donc effet stable si on utilise une sélection des cellules ayant intégré le vecteur) ou AAV.  [...] Pour un shRNA, on utilise un lentivirus qui permet une intégration stable de la construction dans le génome et donc une expression stable du shRNA. S'il n'y a pas d'intégration, il n'y a pas d'expression.  [...]

[biologie moléculaire] Probleme expression apres transfection stable

J'ai eu le même problème avec des stables (C2C12, cellules de souris) -. Résistance exprimée mais quasiment pas de prot exogène, alors que no problem en transitoire. J'en ai déduis que ça venait du fait que la prot qu'on a cloné soit importante pour la cellule, et que le fait de la surexprimer pouvait avoir un effet négatif sur les cellules, et du fait la sélection favorisait les cellules exprimant peu.  [...] Finalement, je suis en train de voir d'autres alternative. l'électroporation ou un vecteur viral pour une transfection transitoire très importante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Résultats PCR quantitative

Comment l'interprète t-on Est-ce que c'est comme le 2^ Ct, ou si le chiffre obtenu est. 2 on a une a une sur expression, s'il est compris entre 0.4 et 2, l'expression est considérée comme stable et. 0.4 sous-exprimé.  [...] Comment l'interprète t-on Est-ce que c'est comme le 2^ Ct, ou si le chiffre obtenu est. 2 on a une a une sur expression, s'il est compris entre 0.4 et 2, l'expression est considérée comme stable et. 0.4 sous-exprimée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transduction/transfection

C'est une question interéssante et j'avoue que je ne suis pas sûre de moi mais je n'avais pas la même idée que toi, pour moi la différence ne réside pas dans une expression stable ou prolongée. Pour moi, la transfection c'est utiliser des méthodes chimiques ou physiques pour introduire ton plasmide, comme des liposomes, ce qui n'empêche pas de distinguer une transfection stable et transitoire.  [...] Salut Fxmulder, merci pour ton avis... Qu'est-ce que tu entends par utiliser un vecteur viral est plus rapide/mons aléatoire que d'utiliser un agent transfectant Pourtant, tous les kits lipofectamine et autres utilisent ce genre de matériel pour avoir des transfections quellles que soientt les cellules en face, non D'ailleurs les cultures cellulaires que j'ai (expression permanente d'un canal) sont stables et ont été faites avec justement la lipofectamine.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 6

Ces MDCK sont une lignée stable pour l'actine GFP. Enfin relativement stable car les cellules du haut n'ont pas un niveau d'expression au-dessus du seuil de détection.  [...] Ainsi, la distribution physiologique de l' 127 I peut être observée en bleu, tandis que l' 129 I (en rouge) donne des informations sur l'absorption des isotopes de l'iode à très courte durée de vie lors d'une contamination. Champ. 50 µm x 50 µm, inclusion dans du Spurr, épaisseur des coupes 0.   [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

Normalement oui tu mettre des plasmides dans des cellules eucaryotes puisque quand j'étais en stage on avait transplanté des plasmide à l'intérieur de cellules cancéreuse. Il s'uffit de faire une électroporation ou autre manipulation du genre pour qu'il soit intégré.   [...] Donc en gros tu aura une expression stable grâce à une intégration, ou une expression transitoire (3-4 jours max) sans intégration du plasmide dans le génome de la cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] shRNA

Peux-tu nous donner un peu plus d'indications de ce que tu veux faire et sur quel point tu as besoin d'aide pour ton design Tu veux cloner ta séquence shRNA dans un vecteur d'expression.  [...] Sinon je sais qu'il existe des programmes en ligne qui te proposent en fonction de la séquence de ton ARNm des séquences siRNA en tenant compte de tout un nombre de critères mais malheureusement je n'ai pas en mémoire lesquels... Dans ce cas il faut que tu testes 3 séquences différentes contre ta cible pour t'assurer que l'une au moins va fonctionner.   [...]