• Forum - Transfert, Protéine, Membrane

synthèse des proteines et translocation

-dans le cas ou il y a une séquence hyrdrophobe supplementaire la proteine sera ancrée à la membrane du REG, alors si cette proteine est sensée allez vers la membrane plasmique pour etre une proteine de constitution comment elle va le faire, est ce que toute la partie de la membrane du REG va se détacher.  [...] Toutefois, quand la protéine est vouée à être exprimée dans une membrane, elle possède un domaine transmembranaire. Le domaine transmembranaire (ou les domaines) est le domaine qui sera ancré à la membrane. une fois qu'il passe le translocon, il constitue un Signal d'Arrêt de Transfert (SAT, stop-transfert signal, STS).  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification d'un serum à partir d'une membrane de nitrocellulose

Dans le cadre de mon mastére, je me propose de purifier un serum à partir d'une membrane de nitrocellulose,l'anticoprs j aurais à l utilisé pour une chromatogrphie d'affinité pour purifier une proteine periplasmique.  [...] Donc en gros, je fais migrer un echantillon contenant la proteine toxoplasmique P30 par SDS-PAGE puis aprés transfert, saturation et incubation avec un serum (à purifier) je coupe une portion de la membrane qui correspond a la proteine d interet et j utilise un tampon d elution pour eluer les anticorps a partir de la membrane.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vérification transfert W.Blot

En fait quand on fait un western, on part du principe que pour des proteines de taille standard, si elle ne sont plus dans le gel apres transfert et coloration au bleu de coomassie, alors elles sont sur la membrane. Ceci est vrai si la polarité a été respectée durant le transfert, sinon les protéines sont dans le tampon et pas sur la membrane (mais dans ce cas, ce sont toutes les protéines).  [...] L'utilisation d'un marqueur de poids coloré permet aussi de s'assurer immédiatement que le transfert s'est bien déroulé (i.e. que les protéines ont été transférées sur la membrane), mais ne montre pas que le transfert a été homogène sur toute la membrane à l'inverse du rouge ponceau.  [...]

[Biochimie] tampon de lyse

Il me semble que le CHAPS (détergent doux) est utilisé pour récupérer les protéines membranaires car il a l'avantage de solubiliser les membranes sans dénaturer les protéines (à la différence de détergent fort comme le SDS). Le triton 1% est un peu léger seul dans ton cas, il n'a pour effet que de déstabiliser la membrane plasmique provoquant sa rupture.  [...] j'ai lysé mes cellules par un tampon de Karla au Bertin,le tampon renferme dees antiprotéase,PMSF,NAF,EAU,Napp.Je cherche aussi bien des protéines membranaire et du stress oxydative certaine sont cytosolique,c'est bisard j'ai fais un dosage BCA j'ai des concentrations trés faible en protéine entre é 2 et 5 mg/ml mais c'est jouable pour déposer en faisant l'éléctrophorése à la fin du transfert j'ai révéler au ponceau il n'ya pas eu de transfert sur ma membrane et effectivement à la révalation d'une protéine j'ai rien vu au chémidoc alors que les marqueurs ont transférer.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon SDS-PAGE

le SDS dans un WB permet aux protéines d'avoir une charge proportionnelle a leur masse et donc de les faire migrer selon leur poids moléculaire indépendamment de leur structure. Le SDS a d'autres utilités, on le trouve dans certains tampons de lyse ou il a un role de détergent des membranes.  [...] Son utilité est de dissocier le SDS de la protéine afin que celle-ci puisse interagir avec la nitrocellulose ou le PVDF, et y rester fixée. Pour cette raison, il est important que le pH du tampon de transfert soit entre 8 et 8,5 pour que la protéine migre bien vers la membrane puisque sans SDS elle migre selon ses propres charges et non plus celles du SDS qui l'entouraient.  [...]

[Biochimie] le native PAGE !! et western blot "natif"

j'aurais voulu savoir si quelqu'un par ici a l'experience du native PAGE et surtout du transfert sur membrane derrière.  [...] en effet j'ai une proteine positive à faire migrer pour cela j'avais inversé les bornes lors de l'electrophorèse afin qu'elle puisse migrer tranquillement vers le moins et pareil lors du transfert (sauf que la j'avais inversé la membrane et le gel) et le resultat à la fin est assez surprenant vu que mon anticorps semble detecter quelque chose mais ca ne donne pas des bandes mais on dirait juste une membrane degueu.  [...]

[Biochimie] Western Blot? Principe de la méthode?

J'ai lu, qu'une étape de transfert entre le gel et une membrane avait lieu, et ensuite une étape de detection avat lieu (anticorps...).  [...] Bah justement, tu as donné la réponse dans ta question, il y a une étape de transfert sur membrane suivie d'une étape d' hybridation qui permet de mettre en avant de manière spécifique une protéine, un ADN ou un ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western Blot Transfert sur membrane

Oui c'est ça je mets 3 membranes les unes sur les autres...et là j'ai des bandes bleues sur les 3 (les bandes de fin de migration) mais qd je les mets dans le rouge pinceau je vois aucune bande donc pas de transfert de protéine Ou un over transfert.  [...] Mon problème en ce moment c'est qu'après le transfert sur membrane mes bandes de protéine sont coulantes comme si on les avait frottés tout comme les bandes du marqueur de poids moléculaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] cellules a mediateur chimique

Les médiateurs chimiques sont de natures différentes (ions, macromolécules rotéiques,lipidique glucosidique voir le mixte des trois, donc hydrophile ou hydrophobe, et donc on un action trés différentes ( on parle souvant d'hormones mais pas forcement tout dépend la manière dans la moécule est produit et la façon qu'elle transite dans l'organisme.   [...] ils peuvent avoir un rôle dans la synthèse d'ARN donc d'une protéine, de réguler divers éléments de la cellules, comme le pression osmotique, la concentration en ions qui elle même peut réguler la polarisation de la cellule (je pense pas exemple la libération de Acétylcholine au niveau des synapses, qui induit le transfert du message nerveux excitateurs grace un un ensemble de mécanismes liée à la dépolarisation de la membrane.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

2) Je souhaite transférer une protéine de 210 kDa sur membrane PVDF. J'ai fait un transfert à 70V sur 90 min mais les hauts poids moléculaires n'ont pas bien transféré (il restait un peu d'échelle dans mon gel). Quelqu'un a une idée des meilleurs conditions de tranfert pour ce type de protéines J'ai entendu parler de transfert overnight à 4°C 12V.  [...] Pour le transfert de ta protéine, fait le 2H à 100 V (en utilisant un bain de glace bien sûr). Sinon garde le même voltage mais laisse plus longtemps. Je n'utilise pas le PVFD alors moi je transfert avec de l'éthanol qui me donne de meilleurs résultats mais toi tu es obligée de prendre le méthanol.  [...]