• Forum - TAP, Tag, Grande échelle, Protéines, Interactions

Levures et TAP tag à grande échelle

En fait, je comprends parfaitement la technique du TAP tag (purification ou même élimination d'une protéine cible avec billes d'IgG et de calmoduline) mais en revanche, je vois mal comment identifier des protéines et leurs interactions avec cette technique.  [...] La technique du TAP-tag permet bien de purifier des complexes entiers. On utilise une protéine fusionnée au tag comme appat, et au bout de deux purifications (colonne d'IgG et colonne de calmoduline), on considère que les protéines co-purifiées interagissent de manière assez spécifique avec la protéine d'intérêt pour qu'elles forment réellement un complexe.  [...]

[Biologie Moléculaire] différence(s) TAP-tag / IP ?

jai une petite question, jaimerais savoir quelle est, en gros, la différence entre le système TAP-tag et la co-immunoprécipitation pour le TAP-tag on peut purifier des complexes protéiques et donc detecter des interactions protéiques mais ne peut on pas le faire aussi avec de la Co-IP.  [...] La méthode TAP est quand meme beaucoup plus propre qu'une coIP puisqu'elle repose sur deux étapes d'immunoprécipitations permettant ainsi de minimiser le bruit de fond. Tout l'intérêt du TAP tag est la.  [...]

[Biochimie] Etude des partenaires protéiques : Co-Immunoprécipitation, Tap-Tag et double hybride

Et je me posais la question de savoir quel type d'anticorps fallait-il utiliser pour la Co-Ip Un anticorps poly ou monoclonal Si j'utilise un anticorps polyclonal, il risque de se fixer un peu partout sur ma protéine et je risque d'empêcher les interactions.  [...] tap-tag. c'est de l'in vivo aussi, y a pas le problème des anticorps comme l'IP, et c'est bien pur grâce à l'utilisation de deux colonnes justement, mais après c'est fait avec une protéine de fusion donc ça peut aussi changer l'interaction.  [...]

Purification protéine taggée avec HIS6

Je vais avoir plus de questions que de réponses puisque les quelques productions de proteines His-tag que j'ai faites ne m'ont posé aucun problème particulier, ce qui est une chance, mais en général, pas très formateur.  [...] J'ai la chance que les deux formes de protéines eventuellement attendue vont données des cartes de digestion a la trypsine différentes. Cela devrait donc etre simple à déterminer je pense.  [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

Chaque point qui s'allume indiquera une interaction direct entre la calmoduline et la protéine fixée. Et vu qu'il y a environ 5800 protéines sur la puce (pour la levure), cela te permet de tester en une seule expérience une (très) grande quantité d'interactions.  [...] Son avantage majeur reste qu'il devient possible de tester rapidement et pour peu cher les interactions d'une protéine sur un quasi-protéome, même s'il faut confirmer les résultats après avec une autre technique, cela permet de réduire grandement le temps de recherche (et le nombre d'étudiant faisant du double hybride ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Quel est le rôle du protéasome ?

Un des genes pouvant provoquer la maladie est celui de la Parkine, une proteine ayant une activite E3 ubiquitine-ligase (les E3 sont les enzymes qui lient de facon specifique l'ubiquitine a ses substrats). Lorsque ce gene est mute, un certain nombre de proteines ne sont plus degradees par le proteasome et s'accumulent dans les cellules ce qui finit par en provoquer la mort.  [...] Pour la production d'antigene, le proteasome est toujours dans le coin, pas tres loin du RE et des proteines TAP qui servent justement a amener les peptides antigeniques vers les molecules du CMH-1. Mais j'avoue que je ne me rappelle pas si il y a une association directe entre le proteasome et le complexe TAP.  [...]

[Biotechnologie] purification d'une protéine

Là est le problème...Je ne comprend pas par quelle téchnique on peut purifier cette protéine dont on connait uniquement la séquence... peut-on purifier la protéine grâce aux résultats obtenues dans les différentes expériences.  [...] Tu fais une première purification et tu sors ta protéine plus des protéines aspécifiques. En coupant tu détaches de ta colonne uniquement ta protéine (ou presque), et tu repurifies après. Au final la deuxième purif donne une protéine plus pure que la première (moins de bandes parasites).  [...]

Articles importants dans Nature, Science ou Cell

Most of the catalytic power of the ribosome seems to result from tight binding of tRNA substrates in the active site through interactions of their 3' ends with 23S rRNA. In addition to putting the reactive groups in close proximity and a precise orientation relative to each other, the ribosome may work by providing a preorganized electrostatic environment that reduces the activation energy of the highly polar transition state, by shielding the reaction against bulk water, by helping the proton shuttle form the leaving group or by a combination of these effects.  [...] A mon tour. Voilà un truc de microbiologiste particulièrement classe, la découverte de la transtraduction (mécanisme par lequel les bactéries taggent leurs protéines non fonctionnelles cotraductionnellement avec un ARN unique, appelé ARNtm ou ARn-SsrA, jouant le role de messager et de transfert) chez E.  [...]

[Immunologie] présentation antigénique

Les protéines du cytosoles sont dégradées et chargées sur MHC I, celles qui sont endocytés sur le MHC II. Les molécules du soi sont forcément portées par les MHC I (ben oui un truc endocyté forcément c'est pas du soi). Mais la réciproque est fausse. Tu peux avoir des protéines virales dans le cytosole qui vont être processées comme des protéines de la cellule (protéasome,TAP,etc.  [...] Je voudrai aussi rajouter, à tout hasard, que les antigènes sont classés selon leurs caractéristiques physiques (corpusculaire, par exemple. soluble ou insoluble),leur nature chimique (protéines, polysaccharides, ADN monocaténaires, phospholipides et leurs complexes mutuels tels que les glycoprotéines, lipopolysaccharides, etc.  [...]

[Immunologie] Les cellules présentatrices d'antigène.

(Presque) toutes les cellules infectées peuvent présenter des antigènes aux lymphocytes T via leur CMH de classe I mais c'est les T qui vont migrer et qui sont donc vr aiement considéré comme APC. Certaines APC peuvent faire de la présentation croisée. Ce que ej te dis est très schématique.   [...] Les peptides dégradés issus du protéasome font un tour dans le REG en étant pris en charge par des protéines membranaires, les TAP (transporting antigène processing). Ils sont alors chargés sur les chaînes du CMHI ancrés à la membrane du REG et cette liaison assure la stabilisation d'un domaine non variable du CMHI appelé béta-2 microglobuline. la structure du CMHI est formée.  [...]