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[Biologie Moléculaire] Electrophorèse (ADN sur Agarose) et Bromure d'éthidium - Page 2

Il y a une différence entre témoin de coupure et estimation de la taille Le plasmide natif est un témoin négatif. il me montre ce que je dois voir sur mon gel si mon enzyme n'a pas coupé. Mais Yoyo parlait de la taille ici. Pour ça, tu as le ladder.   [...] je me demande combien de BET je dois mettre dans le tampon de charge pour bien visualiser mes bandes.  [...]

[Biologie Moléculaire] tampon de charge

j'ai trouvé plusieurs tampon de charge, j'aimerais savoir est ce que le tampon bleu/ orange loading day 6x est bon pour la biologie moléculaire ou il faut mieux d'utilisé un autre tampon de charge.  [...] Le plus critique dans ce genre de tampon de charge, c'est de s'assurer qu'on n'a pas un colorant qui va gêner la visualisation de nos bandes d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Bandes d'électrophorèse disparaissant ...

2// Un halo de fluorescence apparait autour des colorants du tampon de charge. On a eu le problème avec le Orange G contenu ds le tampon de Promega, avec la formation d'un halo bleu ciel assez intense qui masquait les bandes. J'ai donc refait un tampon de charge contenant uniquement du bleu de bromophenol, et là pareil, en moins intense.  [...] Pr l'histoire de halo. en fait, on utilise un tampon de charge qui contient trois colorants. xylene cyanol, bleu de bromophenol et orange G (Promega), les trois migrants environ à 4000, 300 et 50pb environ, respectivement. Quand on révèle sous UV, les taches correspondant aux colorants sur le gel sont sombres et ne genent en général pas la révélation, elles masquent légèrement ms rien de grave.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Rien ne semble abérant à mon avis ton souci est au niveau de ton tampon de charge. Tu aurais possibilité d'essayer un laemni de chez Biorad pour comparer.  [...] Je viens de refaire un gel avec des tampons d'une collègue ainsi que son tampon de charge qui fonctionnent très bien ensemble. Mais visiblement dans mes mains non. J'ai toujours un front de migration flou et des bandes de protéines pas très nettes... *PAN*.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse SDS page

Pour les bandes en haut. on s'accorde à dire que ça serait dû à un manque de dénaturation des protéines. tu peux donc augmenter le pouvoir réducteur de ton tampon de charge (augmenter alors la quantité de b-mercapto ou de DTT) et chauffer plus longtemps.  [...] A quel moment Et bien comme normalement on a dû te l'expliquer si ton encadrant direct est reponsable. après avoir mis ton tampon de charge et juste avant de charger les échantillons sur ton gel. En général, on fait 5 min à 95C.  [...]

[Biotechnologie] Electrophorèse sur gel de polyacrylamide

Vous placez des bandes d'acétate dans un tampon tri-véronal (200 ml pour trois bandes) pendant 10 à 20 minutes puis vous essorez l'excès de tampon en plaçant les bandes entre deux feuilles d epapier absorbant.  [...] bonjour, étudiant en 2eme année de licence, j'ai fait une electrophorèse sur gel de polyAA en présence de tampon tri veronal. Quelqu'un sait quel est le pH de ce tampon ce n'était pas marqué dans le protocole et j'en ai besoin pour le compte rendu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse (ADN sur Agarose) et Bromure d'éthidium

En mettre dans le gel est suffisant pour voir aux UV les bandes d'ADN. Le problème de l'éthidium, c'est qu'il est chargé positivement et il migre donc dans le sens opposé à l'ADN. Si vous laissez migrer trop longtemps votre ADN, il peut ne plus y avoir assez d'éthidium dans le bas de votre gel et vous risquez de ne plus voir les bandes de faible masse moléculaire (vous devez d'ailleurs avoir des petits fragments vu que vous utilisez un gel à 2% non ).  [...] Le fait de rajouter du bromure d'éthidium (BEt) dans le tampon de migration va permettre à l'éthidium du gel d'être remplacé par celui du tampon. Comme ça vous avez plus de chance de voir vos bandes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Profil PCR/RAPD

1-les échantillons avec le tampon de réaction transparent auquel j'ai ajouté un tampon de charge n'ont rien donné= aucune bande, rien, nada.  [...] 1-l'absence de bandes pour la première série (tampon de réaction non coloré) est-il dû au tampon de réaction ou à l'amorce qui ne s'est pas hybridée.  [...]

[Microbiologie] digestion d'un vecteur

je dois digérer mon plasmide p blue script (taille 3 kb ) avec Ecor I le produit d'extraction par miniprep se présente sur gel sous une forme surenroulée (1.5 kb) j'ai testé le tampon H seul sur le plasmide par incubation durant 1 h à 37 °c pour vérifier si oui ou non le tampon H est contaminé par des endonucléases sur gel j'ai obtenu deux bandes une à 1.  [...] 5 kb et l'autre à 3 kb or la miniprep ne m'a pas donné la bande à 3 kb s'agit il d'une digestion partielle le tampon est 'il contaminé je vous demande de m'aider s'il vous plaît.  [...]

Acides Nucléiques

L'ADN est chargé négativement. La séparation se fait en fonction de la taille des fragments qui diffère d'un seul nucléotide entre chaque bandes les plus proches visible sur le gel.  [...] Salut. Au moment de la migration, la charge est identique pour chaque fragment d'ADN car la préparation de ton ADN pour l electrophorese sert justement a masquer la charge réel de tes fragments afin que ces derniers aient tous la même charge fictive et migrent uniquement selon leur poid moléculaire.  [...]