• Forum - Solvants, Intérêt, Protéines

[Biochimie] Questions Coomassie et Western Blot

Le méthanol et l'éthanol rendent le gel plus poreux, ce qui permet de faciliter les échanges avec le tampon (que ce soit de transfert ou de staining en coomassie). Cela permet une meilleure pénétration du coomassie dans le gel pour colorer les protéines, et cela facilite la sortie des protéines du gel pour le transfert.  [...] Pour le transfert, les solvants ont un intérêt beaucoup plus forts car ils permettent la dissociation du SDS des protéines, ce qui permet aux protéines d'interagir avec la membrane de PVDF par interactions hydrophobes et électrostatiques, mais pas ioniques comme l'exigerait une interaction avec le SDS.  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

$récupérer les protéines apres extraction aux solvants organiques n'est pas le mieux. Je sais que l'hypophyse n'est pas énorme, mais l'idéal est d'extraire les ARN et protéines séparément.  [...] Un autre problème peut être que le SDS induit quelques soucis dans les dosages de protéines par la méthode Lowry. Dans certains kits tu as un produit supplémentaire à inclure dans ta réaction si tes échantillons contiennent du SDS, je saurais pas t'en dire plus vu que j'ai toujours utilisé ce genre de kit en suivant bêtement le protocole fourni.  [...]

[Biologie Moléculaire] CT variable

je suis en stage en M2, j'ai comme objectif de mesurer la variabilité de l'expression de certains gènes d'intérêt, pour cela j'ai dessiné des amorces qui ciblent ces gènes dans différentes espèces bactérienne. Je suis entrain de faire la validation des amorces j'ai donc fais une gamme étalon avec 5 différentes dilutions de mon échantillon ( facteur de dilution 2), et de différentes concentrations d'amorces dans le mélange réactionnel.  [...] je me pose cette question parce qu'ayant eu des rapport 260/230. 1.8 cela indique que mes ARN sont contaminés par des protéines /solvants.  [...]

[Biologie Moléculaire] problème dosage au Qubit Invitrogen

Je confirme ce que dit malesore, c'est classique. Le nanodrop surévalue quasiment toujours la concentration, car il peut y avoir beaucoup d'autre chose qui absorbent à 260. (proteines, solvants etc...).  [...] Pour te répondre Yoyo, je ne pense pas que ça vienne d'un problème de pureté dans mon cas puisque le nanodrop me donne des rapports de Do assez bon. Et même s'il y avait des traces de protéines je ne pense pas que ça explique une telle différence. 3 fois moins je trouve que ça fait beaucoup même si le Qubit est plus précis.  [...]

[Immunologie] Le mécanisme de rejet d'un corps non organique

Les corps étrangers (matière plastique par exemple) présentent une surface qui adsorbe des protéines en causant leur déformation. Ces protéines déformées sont reconnues comme anormales et déclenchent la réaction immunitaire.  [...] Il existe dans le sang, plus précisément dans le plasma des protéines C, le therme de systéme du complément désigne l'ensemble de ces protéines qui participent participent au système immunitaire. Les surfaces lipophile, c'est-à-dire une affinité avec les solvants organiques, tel que le plastique (présent dans le stimulateur rétinien) absorbe et causes la déformation de ces protéines notamment de la C3b.  [...]

Dosage des macromolécules biochimiques

Pour la valeur des rapports, on doit pouvoir les retrouver de manière théorique, connaissant les spectres d'absorption des AN et des protéines, et en écrivant que.  [...] 260 est le max d'absorbance des acides nucléiques, donc on utilise cette valeur pour les mesurer. 280 car certaines protéines (ainsi que certains solvants) absorbent à cette longueur d'onde.  [...]

[Biotechnologie] Fplc

Je ne sais pas ce qu'est la FPLC, internet ne m'aide pas du tout et mes notes de cours non plus (tout ce que j'ai écris là-dessus. basse pression... grandes colonnes qui servent à l'exclusion moléculaire...lol).  [...] - Effectivement on parle de basse pression. Les pressions générées sont bien plus faible qu'avec une HPLC mais par contre elles sont plus élevées qu'en phase ouverte (élution via la gravité). C'est un système de pompe qui permet d'envoyer le(s) solvants et la solution d'intéret.  [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

D'après ma compréhension, cette combinaison sert à rendre plus pure la phase aqueuse, en d'éliminant un maximum d'ADN et protéine s'y trouvant encore. Est-ce tout ou y a-t-il un autre but.  [...] Le phénol et le chloroforme sont des solvants qui solubilisent la mb plasmique. Le thiocyanate est en effet un truc qui tue tout (un chaotropique) mais le SDS seul ne suffit pas a ma connaissance à dénaturer les protéines. SInon tu as bien compris le principe.  [...]

Solubilité des protéines et role d'un acide biliaire

Les détergents ioniques ont pour but de déchausser les protéines des membranes en les recouvrant de charges, les séparant de ce fait. Pour l'action des solvants organiques sur les membranes, cf nos amis chimistes.  [...] Il faut distinguer les détergents forts, type SDS, qui dénaturent les protéines, et les détergents doux, non dénaturants (comme le Triton) qui entourent la protéine en interagissant avec ses parties hydrophobes, dans sa conformation native.  [...]

[Biochimie] Western blot sur Fractions polysomales

Il me semble normal qu'avec des extractions utilisant des solvants organiques tu obtiennes un mauvais résultat en western, mais je peux me tromper. S'il reste des traces de solvant, cela peut interférer sur la liaison SDS/protéine.  [...] Bonsoir, voici une méthode qui permet de séparer les acides nucléiques des protéines, et qui devrait donc fonctionner sur tes fractions. Cependant je ne l'ai jamais tester sur des polysomes.  [...]