• Forum - Solutions, ARN, Température ambiante

[Biologie Moléculaire] Conservation ARN

Après une panne de congélateur nous nous sommes posés la question de la température de conservation des ARN après extraction.  [...] J'ai déjà vu des ARN se dégrader en moins de 18 mois à -20°C. Je conseille le -80°C et/ou maintenant on trouve des publicités avec des solutions pour stocker l'ARN à température ambiante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

En fait, tes solutions stock pour le tampon de lyse, a quelle temperature sont-elles stockées A temperature ambiante ou a 4°.  [...] Merci encore pour tes reponses. J'ai commandé les AC dont tu m'as donné les ref. Je devrais les avoir d'ici demain. Alors, avant de lancer mon gel, j'aimerais quand meme avoir quelques precisions encore. les as tu utilisés A quelles dilutions marchent ils correctement.   [...]

ADN

L'ARNr par exemple est retrouvé avec de nombreuses structures secondaires et tertiaires dans la cellule, stabilisé dans une conformation définie. Il possède des extrémités 2'OH qui peuvent expliquer sa réactivité plus forte que l'ADN. Donc à priori il n'y avait aucune raison pour que l'ARN n'ait pas d'activité enzymatique.  [...] On est bien d'accord sur la réactivité de l'ARN par rapport a l'ADN, suffit de voir la rapidité avec laquelle l'ARN se dégrade dans l'eau a température ambiante par rapport a de l'ADN tres stable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Difficultés pour solubiliser de l'arn

Ce qui se passe c'est que même en chauffant à +65°C au bain marie pendant 25 minutes bien que mon culot se soit désagrégé il n'est pas solubilisé. Probablement qu'il est trop sec. Auriez-vous une solution à me proposer car il faut que je récupère le maximum de mon ARN dans l'objectif d'en extraire les ARNm et de construire une banque d'ADNc. Merci.  [...] Le plus simple est de mettre ton volume d'eau voir un peu plus quitte a diluer legerement ton ARN. et tu incubes a temperature ambiante plusieurs heures. Tu peux tenter de chauffer mais l'ARN est fragile alors.  [...]

liaison

Une fois le glucose cassé, l'oxygène va se recombiner avec les morceaux, créant de nouvelles liaisons. (C'est une simplification, la séquence des opérations est assez complexes.) Le bilan est en faveur de la libération d'énergie. L'énergie libérée à la formation de H 2 O et CO 2 est bien supérieure à celle qu'il a fallut amener pour casser le glucose.   [...] Oui, mais se sont des liaisons électrostatiques Auquel cas, la température augment simplement l'agitation thermique et donc la séparatio,  [...]

[Microbiologie] Viabilité d'une bactérie et ARN - Page 2

Non les ARN ne sont pas stables a hautes températures, meme a température ambiante ou à -20 il y a une autolyse des ARN. C'est une molécule tres instable, il est normal qu'elle ne resiste pas a des incubations prolongées a 92 ou 95°C.  [...] a mon avis l'essentiel de la dégradation des ARN c'est les RNases. Lorsqu'ils sont propres, mes ARN peuvent rester 10 min a 95 ou 20 min a 65 ou meme une journée a room temp sans problèmes. Vu que les RNases sont plus actives lorsque la température augmente, je propose donc ces inhibiteurs de RNase. Quel est l'autre solution.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot flou

les solutions sont les mêmes qu'utilisent mes collègues, que ce soit pour la fabrication du gel, ceux pour le transfert ou de révélation. je fais un petit gel à 10% qui migre 5h à 100 V à température ambiante.  [...] de toute manière dés lundi j'ai prévu de refaire toutes les solutions on ne sait jamais. ce sont des solutions stocks préparéés à chaque fois par un membre du labo donc on ne sait jamais surtout qu'on vient de me signaler un doute sur le tampon de migration préparé par 2 personnes différentes (donc y a déjà un doute).  [...]

ARN dans les prélèvements sanguins et les biopsies

1/ Pour un échantillon fluide en particulier un prélèvement sanguin est ce qu'on utilise un TRIzol particulier et quel volume minimal de départ peut on utiliser.   [...] 2/ Après le prélèvement sanguin est-ce qu'il est conseiller d'utiliser un anti-coagulant et de conserver l'échantillon à température ambiante (quelques jours), la coagulation du sang peut elle influencer la survie, la qualité des ARN sachant que les ARN qu'on cherche codent pour un facteur de croissance.  [...]

ARNs à 65°C

pas très concentrée sur mes manip ce soir, j'ai mis mon ARN durement obtenu à 65°C... serait-il dégradé je pense qu'il s'est dénaturé mais en le remettant à température ambiante il devrait se renaturer.  [...] a haute temperature l'ARN s'autodégrade (rien a voir avec la denaturation des structures secondaires). Tout depends donc combien tu l'as laissé.  [...]

Dégradation des ARNs DNAsés ?

Autre possibilité même si je n'y crois pas trop. quels sont les cycles de température que tu as utilisé pour ta RT Peut etre as tu utilisé une température trop haute qui a fini par dégradé tes ARN.  [...] Pour la RT, j'ai mis tous les produits nécessaires, plus ARN et incubation 15min à température ambiante, puis 50min à 45°C et enfin 10min à 55°C. Et c'est en accord avec les recommandations du constructeur.  [...]