• Forum - Solution, Activité, Protéines, Concentration

[Biochimie] facteur de purification et rendement

Lors de la détermination de l'activité de la pyruvate kinase, on a utilisé 100 microlitres de solution à 0,1 mg/mL, prélevés sur les 200 mL de solution obtenue après une étape de purification par chromatographie d'achange d'ions portant sur 1 litre de solution de départ dont l'activité spécifique était de 10 U/mg de protéines et la concentration en protéines de 2 mg/mL.  [...] j'aurais besoin d'une précision la concentration de 0.1mg/ml c'est bien la concentration en enzyme dans la solution finale as tu la concnetration en protéine finale.  [...]

determination de l'activité xanthine oxydase dans le foie

en utilisant les Absorbance spécifique à l'acide urique produite pendant les 10mn de réaction comment calculer l'activité spécifique de cette protéine en nmol d'acide urique/min mg de proteine.  [...] Pour le calculer on part de l'activité enzymatique qui sont les micromoles de produits formés par minutes et par ml de protéines et de la concentration en protéine en solution (mg/ml).  [...]

[Biochimie] enzymologie

De plus le volume réactionnel et de 10mL contenant 0.2mL d'enzyme à une concentration initiale de 10mg/mL et la longueur du trajet optique et de 1cm.  [...] Il est possible de la calculer à partir de l'Activité Enzymatique (micromoles de protuits formés par minutes et par mL de protéines, soit U/mL) déterminée de manière expérimentale et de la concentration en protéine en solution (mg/mL).  [...]

[Biochimie] Unité enzymatique

En effet merci mais c'était juste pour m'éclaircir un peu car enfaîte j'ai un échantillon ou on a une activité de 0,754 UE/mL et je dois déterminer la masse en mg de protéines, la concentration de ces mêmes protéines en mg/mL et enfin l'activité spécifique en UE/mg.  [...] L'unité internationale notée U(I) correspond à la quantité d'enyme permettant de transformer 1 micromole de substrat par minute.   [...]

[Biochimie] méthode etude macromolécules

Comme tu le dis il s'agit d'une méthode pour suivre la purification des protéines c.a.d observer la quantité de protéines (par exemple) à un instant T. Cependant, il faut d'abord purifier les protéines par exemple en colonne d'exclusion par la taille (ou toutes autres méthodes) tu récolte au fur et à mesure dans des béchers puis direction cuve de spectro pour avoir une idée de la quantité (il y a ou pas et en quelle proportion).  [...] On ne peut pas discriminer des protéines en mesurant l'absorbance à 280nm. La seule information qu'on peut en tirer, c'est la présence ou non de protéines contenant des AA aromatiques dans la solution. On peut éventuellement déterminer la concentration d'une solution contenant une seule protéine si on connaît le coefficient d'absorption de celle-ci.  [...]

La mesure de l’activité enzymatique par spectrophotométrie et sa relation avec l’NAD

Si par exemple, dans une réaction, l'un des produits absorbe dans l'UV à 280 (comme toutes les protéines ) mais on a aussi un conezyme NAD impliqué dans la réaction et qui absorbe à 280 nm et à 340 nm aussi, alors lequel des deux serait utilisé pour l'étude de l'activité de cette enzyme par spectrophotométrie Pourquoi.  [...] Si j'avais bien compris, on utilise 340 nm car à cette longueur d'onde seule l'NADH absorbe alors l'absorbance serait exclusivement proportionnelle à la concentration de NADH dans la solution, tandis que cette concentration d'NADH mesurée serait elle-même proportionnelle à l'activité de l'enzyme. Est-ce correct.  [...]

Solubilité

solubilitée extraction par solvant...un soluté est plus soluble dans un solvant que dans un autre donc on peut l'extraire facilement, chromatographie...ca permet la séparation de proteines par exemple en fonction de leur solubilité, phénomène de saturation.  [...] ..precipitation qd la concentration en substance dissoute est trop importante, relarguage...trop de sels dans une solution de proteines vont faire precipiter ces proteines elles sont dénaturées. Les exemples sont tres nombreux en biologie et en chimie, a toi de choisir.  [...]

Gel Shift : problème avec la compétition

Ca arrive souvent qd tes conditions ne sont pas optimales et/ou que l'affinite de ta proteine pour l'ADN est tres important. Tu peux essayer de mofier la composition du tampon de shift. Es tu sure que ta proteine se fixe sur cette sequence d'ADN Comment l'as tu identifiee.  [...] Le fait que ta proteine precipite au frigo, ce n'est pas bon du tout. Ta concentration change, et l'activite egalement. Generalement on conserve les proteines a -80 deg.  [...]

[Biologie Cellulaire] PBS ou TBS

Tout d'abord à quoi cela sert d'avoir des tampons salins. Pour éviter l'agrégations des protéines et des anticorps sous l'effet des forces électrostatiques. Les ions de petites tailles viennent former un écran autour des protéines chargées. En cas de bruit de fond on peut augmenter la force ionique de la solution en poussant la concentration de NaCl jusqu'a 0,5M.  [...] Il a particulièrement insisté sur le fait que les surfactant n'étaient pas trés stable et que les produits de dégradation peuvent dénaturer le protéines. Il fut donc les acheter par petites quantité afin d'éviter les soucis. Pour lui c'est la principale cause de problème sporadique en IHC.  [...]

[Biochimie] proteine

plus la concentration saline d'une solution contenant une proteine est elevée et plus l'activité de cette proteine est importante. vrai ou faux.  [...] Chez les bactéries halophiles au contraire de grandes concentrations en sel sont nécessaires pour maintenir les conformations protéiques.  [...]