• Forum - Séquence, Restriction, Promoteur, Sens

[Biologie Moléculaire] Problèmes: Recombinaison d'un plasmide

Lorsqu'on incorpore un gène dans un plasmide disponible dans le commerce, on aimerait insérer le moins d'ADN supplémentaire possible en plus du gène réel avec son promoteur. Parfois, cependant, il n'y a pas de séquence de restriction appropriée dans la région avant et après le gène qui peut également être trouvé dans le plasmide.  [...] Si il n'y a pas de site de restriction utilisable encadrant ton gène, il va falloir en ajouter. On va donc ajouter 2 sites de restrictions différents de chaque côté de ton gène. Note que pour l'énoncé 1 tu peux utiliser 2 fois la même séquence de restriction car comme tu as déjà ton promoteur le sens d'insertion du gène n'a pas d'importance.  [...]

microbiologie (sens anti-sens)

jai cru comprendre que sens c'était vers le sens des aiguilles d'une montre et anti-sens que c'etait l'inverse par rapport au promoteur si c'est ça comment peut on définir si c'est sens ou anti-sens a partir de fragment d'ADN dans une cartographie de restriction.  [...] merci pour votre reponse,oui effectivement, mais au fait vous m'avez mal compris, quand j'ai dit sens ou anti sens c'été par rapport a une cartographie de restriction, on a un brin d'ADN qui a été placé dans le plasmide (on sais pas si il a été placé dans le bon sens), on ajoute une enzyme de restriction ((ECOr, bamhI.  [...]

séquence promotrice / séquence régulatrice

Dans le sens où les polymérases ont une affinité différentes en fonction de la séquence du promoteur (qui est un élément obligatoire pour la transcription.) on peut dire que le promoteur fait partie de la région régulatrice.  [...] exemple chez les eubactéries. Plus la séquence du promoteur est proche de la séquence consensus (TTGACA -quinzaine de nucléotides- TATAAT) plus l'affinité de l'ARN polymérase pour le promoteur est forte et plus il y a de transcription du gène sous contrôle de ce promoteur.  [...]

séquence kozak

je souhaite faire une transgénèse chez la drosophile, je dispose d'un vecteur possédant le promoteur qui m'intéresse. De plus, j'ai également l'ADNc d'interet avec les séquence 5' et 3' UTR mais je clone directement à l'ATG. Je vais créer un site de restriction avant cet ATG afin de pouvoir le cloner faut il aussi que j'ajoute une séquence Kozak pour avoir une bonne expression de ma prot ou n'est ce pas nécessaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence du promoteur du gène résistance à l'ampicilline

J'aimerais savoir où trouver la séquence du promoteur de ce gène. C'est pour savoir si le site de restriction que j'ai choisi n'est pas trop près du promoteur.  [...] Je dois faire une restriction avec une enzyme et il ne faudrait pas que ça me coupe le promoteur. Je dois vérifier que l'enzyme est assez en amont du promoteur.  [...]

[Génétique] promoteur de la transcription

La séquence TATAAT désigne une séquence type d'un promoteur telle qu'on la désigne en lisant le brin codant. Ce brin codant porte l'information d'initiation de transcription.  [...] Attention, la séquence TATA est une séquence de promoteur comme déjà dit, dite consensus, cela veut dire que tous les promoteurs n'ont pas cette séquence exactement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comprendre les cartes des plasmides

Le promoteur est situé sur l'extrémité 5' du gène, en amont de la séquence à transcrire. C'est pour cela que quand tu vas couper et ajouter l'adn qui t'interesse tu vas avoir un sens A et B. Le sens a choisir est celui ou on va avoir l'extremité 5' du gène.  [...] La si tu veux retaper des sites de restriction, c'est trés utile et tu as également la Taq polymerase qui est une adn polymerase qui te sert a effectuer des PCR avec des amorces dans les deux cotés de chaque brin.  [...]

[Biologie Moléculaire] Il y a t-il une séquence promoteur chez les eucaryotes?

Il existe des UPE (upstream promoteur elements) ou DPE (downstream) = autres séquences de liaison en amont ou en aval du promoteur au sens strict.  [...] Maintenant pour ce qui est de la séquence du promoteur chez les eucaryotes, plusieurs promoteurs contiennent une séquence appelé boite TATA au environ de -25 pb en amont du point de départ, certains gènes contiennent un élément initiateur au lieu d'une boite TATA qui est localiser autours du site de départ (+1) et qui possèdent une cytosine à la position -1 et une adénine à la position +1.  [...]

[Biologie Moléculaire] Empêcher la transcription

Certaines séquences sur le promoteur nécessite d'être à une distance précise du point +1 pour être fonctionnelle transcriptionnellement. c'est le cas de la TATAA Box. Ainsi, je suppose que ton promoteur a deux TATAA Box, une pour chaque gène, même si entre eux deux la régulation par les facteurs de transcriptions est commune.  [...] Je ne comprend pas comment ton truc est organise. C'est le meme promoteur que ton gene mais cette sequence est antisens Comment c'est possible sur un seul promoteur d'avoir deux sens de transcription (j'ai peut etre loupe un truc chez la levure).  [...]

Caractéristiques des promoteurs, transcrits...

Vous faut il les caractéristiques générales d'un promoteur ou les caractéristiques d'un promoteur particulier Un promoteur bactérien ou eucaryote Un promoteur pris au sens strict (promoteur minimum) ou au sens large (séquences régulatrices types enhancer, silencer).  [...] ici, un tag est une séquence de 10 pb tirée d'un ou 2 transcrits.. En effet, je dois reconnaitre un transcrit à partir d'une séquence d'un promoteur.  [...]