• Forum - Séquence, Intérêt, Promoteur

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

- La séquence d'intérêt clonée dans un vecteur (plasmide, ADN donc) contenant un promoteur viral (T7, T3 et SP6 sont les plus utilisés).  [...] - Mélanger les ingrédients afin d'obtenir une réaction de transcription de la séquence d'intérêt à partir du promoteur viral. Lors de la transcription, l'UTP radioactif sera utilisé et l'uracile marquée sera ainsi incorporée à l'ARN.  [...]

[Biologie Cellulaire] Fusion transcriptionnelle et traductionnelle

Après traduction tu auras ta protéine d'intérêt (celle codée par la séquence codante 1) + une protéine codée par un gène rapporteur, comme la GFP.  [...] Maintenant si tu veux non plus localiser une protéine d'intérêt mais quantifier l'activité d'un promoteur donné entre plusieurs conditions, tu peux construire quelque chose comme [promoteur d'un gène d'intérêt]-[5'UTR]-ATG-séquence codante d'un gène rapporteur-STOP-[3'UTR et terminateur de transcription].  [...]

OGM - Clonage d'un gène / Construction du trangène

Par ailleurs pour créer un OGM il va aussi falloir créer un transgène, c'est à dire notre séquence d'intérêt mais aussi y ajouter un promoteur, éventuellement des séquences régulatrices et tout ca. Mais comment se fait cette étape la Et une fois que l'on a formé notre transgène, il faut de nouveau utiliser un vecteur pour remultiplier notre séquence d'intérêt.  [...] Je comprends pas bien en quoi le clonage du gène est intéressant. Puisque on pourrait théoriquement formé notre transgène, l'inséré dans un vecteur qui se multiplie et ainsi avoir une grande quantité de séquence d'intérêt sans passer par le clonage.  [...]

[Biochimie] recombineering...

N'est-ce pas possible, à l'inverse, de faire une construction rapporteur+séquence cible de l'ARN non codant, et donc de repérer la transcription de ton ARN d'intérêt par extinction de l'activité du promoteur.  [...] sinon je me suis rappelé des séquences IRES, faudrait que je me renseigne un peu plus pour savoir si ça marche sur la droso. et comment l'intégrer a mon rapporteur et puisque c'est inefficace chez les procaryotes (apparemment), pour le contrôle je vais devoir creuser un peu plus.  [...]

séquence kozak

je souhaite faire une transgénèse chez la drosophile, je dispose d'un vecteur possédant le promoteur qui m'intéresse. De plus, j'ai également l'ADNc d'interet avec les séquence 5' et 3' UTR mais je clone directement à l'ATG. Je vais créer un site de restriction avant cet ATG afin de pouvoir le cloner faut il aussi que j'ajoute une séquence Kozak pour avoir une bonne expression de ma prot ou n'est ce pas nécessaire.  [...]

[Biotechnologie] système conditionnels

J'ai ecris un document qui devrait finir par être publié tot ou tard sur futura-sciences. Si tu as la possibilité d'attendre. le document fais plusieurs pages et il y a à peu près tout pour répondre à tes questions dedans.   [...] Pour faire rapide, tu introduis par recombinaison homologue des sequence de recombinaison de l'ADN (2 sites lox) de part et d'autre de la sequence du gene que tu veux eliminer. Ces sequences lox sont reconnues par une recombinase (Cre) ce qui fait que si tu croises des souris dont le gene d'interet a ete modifie avec des sites lox avec une souris dans laquelle tu as introduit la Cre, si les descendant recuperent les deux genes et (c'est la l'interet du systeme) qu'ils s'expriment dans le meme tissu (choix d'un promoteur specifique en amont de la Cre par exemple), tu auras deletion irreversible de la sequence d'ADN entre tes sites lox et donc un KO conditionnel.  [...]

Clonage orienté

Je suis bloquée, j'ai un peu de mal avec les enzymes de restrictions et je comprend pas tout à fait ce que l'on me demande. Sachant que l'on veut un clonage orienté, on me demande de choisir les enzymes de restrictions utilisable du côté de la bordure portant la séquence du promoteur T7 sachant que le fragment d'intérêt contient un site SacII.  [...] Après PCR, il faut digérer l'insert d'une part, et le plasmide d'autre part. Ces digestions vont permettent de générer des bouts cohésifs entre l'insert et le plasmide. Il suffit alors de choisir deux enzymes de restriction (peu importe lesquelles a priori).   [...]

OGM et pollution génétique de l'eau

Même si c'était lié à la nature du promoteur etc... ça ne tiendrait pas debout. quant une plante est atteinte d'une mosaïque, sont génome s'enrichit également d'une séquence d'ADN comportant un promoteur viral de mosaique ( qui peut être celle du choux-fleur chez le choux-fleur ).  [...] Mais là même problème. comment un insert ( ADN bicaténaire, promoteur, gènes d'intérêt, terminateur ) se transformerait-il en viroïde ( ARN circulaire monocaténaire sans séquence codante ) Il y a des enzymes susceptibles de catalyser ceci dans l'eau de pluie.  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression

svp quelle est la difference entre le vecteur de clonage et le vecteur d'expression à part que l'un a un promoteur et pas l'autre.  [...] Un vecteur d'expression est un vecteur dans lequel on va cloner le même fragment d'ADN après vérification du clonage dans le vecteur de clonage (taille de l'insert, séquence...) et grâce à son promoteur (constitutif ou inductible) ce vecteur va diriger la bactérie hôte d'expression pour produire la protéine d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence du promoteur du gène résistance à l'ampicilline

J'ai la séquence complète du plasmide, mais je ne sais pas quelle est la séquence du promoteur bla (oui c'est celui-ci qui m'intéresse). Je sais juste où débute le codon start du gène bla.  [...] Vous avez la séquence du plasmide. J'imagine que sur la carte vous devez avoir les limites de votre cassette ampi (promoteur et séquence codante). Y a qu'a compter pour trouver la séquence de votre promoteur sur votre plasmide.  [...]