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mode action enzymes de restriction dans une cellule

Bonjour à tous, mon prof a dit en cours que certains polymorphisme se situaient dans des endroits où les enzymes de restriction coupaient. mais dans une cellule, quel est l'intêret du mode d'action d'une enzyme de restriction.   [...] c'est un moyen de défense pour les bactéries. les enzymes de restriction permettent de dégrader de l'ADN étranger. par exemple, on peut supposer qu'E.coli n'a pas de séquence cible à EcoRI dans son génome (EcoRI est une enzyme provenant d'E coli).  [...]

Questions sur la PCR

la totalité du génome de la personne si c'est le cas nos amorces s'hybrident sur les deux chromosomes contenant la séquence cible et c'est ce qui expliquent quon peut avoir deux taches à une hauteur différente sur un southern blot, correspondant à deux allèles différents.  [...] Sinon oui on mets l'ADN total, les amorces sont normalements assez longues pour pouvoir s'hybrider que sur la séquence qu'on veut amplifier.  [...]

[Biotechnologie] creation virus

Si la cible est thérapeutique est une protéine cellulaire et non virale, le virus devra également mettre au point une stratégie alternative pour utiliser cette protéine malgré tout ou pour en utiliser une autre de fonction voisine. Sachant qu'on part d'un virus dont le génome est déjà condensé au maximum, chaque adaptation pour résister à une nouvelle molécule diminuera son efficacité de réplication.  [...] Prend le VIH par exemple (ça marche pour tous ou presque). Lorsqu'il infecte une cellule il arrive avec son information génétique qui pour produire de nouveaux virions doit s'exprimer dans la cellule cible (après intégration pour VIH). Du coup comme la séquence du génome du VIH est connue, n'importe quelle boite de synthèse d'acide nucléique peut te le faire.  [...]

[Biochimie] dnase 1

Admettons qu'un site du génome soit particulièrement ciblé par cette DNAse I. Je suppose que tu peux confirmer ce résultat en vérifiant que ce site n'est plus clivé la DNAse quand il est fixé par une autre protéine. Cette autre protéine empêche l'action de la DNAse, on dit qu'elle protège la séquence d'ADN dont il est question (je te propose une métaphore super naze pour illustrer.  [...] il y a une chaise, quelqu'un s'assoit dessus, donc tu ne peux plus t'y asseoir. C'est l'idée de la séquence d'ADN qui ne peut pas être liée par la DNAse + autre protéine en même temps). J'imagine que c'est une technique utilisée pour les régions promotrices comme tu le cites puisque celles-ci sont la cible de protéines particulières.  [...]

[Immunologie] Vih

Et donc autant de versions différentes des protéines membranaires, apparu sur la membrane suite à l'ajout de la séquence viral dans le génome de la cellule hôte. Pourtant ça aurai pu être des cibles pharmacologiques de choix (détruire la cellule infecté avant que celle ci de libère d'autres virus), mais tu vois bien que trouver une cible médicamenteuse est pratiquement impossible puisque l'expression change tout le temps.  [...] Il n'y a donc aucune reconnaissance antigénique stable possible, car il n'y a ni cible immunitaire (pour notre propre système de reconnaissance) ni cible pharmacologique. Or un médicament n'a d'efficacité que s'il est ciblé. Vas cibler qqch qui n'est ni reconnaissable (site antigénique caché), ni morphologiquement stable (boucle v3 hypervariable / protéines virales membranaires de la cellule hôte).  [...]

PCR et vecteur de clonage

y'a pas aussi une histoire où avec la PCR, il est nécessaire de connaitre la séquence, tandis qu'avec le clonage, il est pas nécessaire justement de la connaitre... seulement, faut avoir des gènes de reconnaissances ( c'est dingue, j'ai déjà oublié le nom exact.  [...] Mais tu dois de toute façon connaître un minimum la séquence que tu veux amplifier de manière à pouvoir élaborer tes primers (=amorçes qui vont encadrer la séquence à amplifier sur chacun des 2 brins). Dans le cas d'espèces peu connues génomiquement parlant, tu peux utiliser une sauce d'amorçes dégénérées qui va être un mélange de primers permettant une hybridation plus ou moins efficace avec ta séquence cible (c'est très simple à comprendre avec un shèmas.).  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation d'une sonde nucléique plasmidique

Voila j'ai un petit probleme lors d'un TP sur l'hybridation d'une sonde nucléique plasmidique non radioactive sur colonies bactériennes on me demande la nature et le role des dépôts d'ADN génomique et ADN plasmidique.  [...] J'ai répondu que l'ADN plasmidique est le témoin négatif et l'ADN génomique le témoin positif car il contient la séquence cible mais je ne sais pas comment l'expliquer ni comment expliquer leur nature.  [...]

Amplification de séquence

Existe t -il une méthode ou un protocole permettant de trouver précisément la séquence cible à amplifié, de trouver les amorces sens et anti-sens et valider le matching de ces amorces sur la sequence cible.  [...] 2 trouvez des primes dans NCBI primer blast en spécifiant la référence de la séquence (NM_00448.2 dans ce cas), qui vérifie qu'on amplifie bien la cible et aucune autre (avec les bons paramètres de Tm, de taille d'amplicon, etc.).  [...]

[Génétique] Démonstration du role d'un miRNA in-vivo

.. (en général...). Tu peux aussi introduire ta protéine avec un 3'UTR muté dans la séquence cible du miRNA et voir si tu récupères un phénotype normal.  [...] 3. valider ta séquence cible en clonant le 3'UTR de ton gène dans un reporter luciferase que tu transfectes avec ton miRNA d'une part et des miRNAs contrôles d'autre part, et tu valides ta cible dans ton 3'UTR en mesurant l'activité luciferase.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amorce sens et antisens

En ce qui concerne les amorces sens et antisens, je ne comprend pas pourquoi l'amorce sens est identique à la séquence cible tend dis ce que.  [...] l'amorce antisens et complementaire à la sequence cible pourtant les 2 amorces doivent hybrider avec l'ADN complémentaire pour débuter la réaction PCR.Je ne sais pas est ce que ma question est claire ou non mais lors de la comparaison de mais amorces avec les sequence cibles sur le site NCBI voila ce que j'ai trouvé.  [...]