• Forum - Sélection, Bactéries, Plasmide, Résistance

[Biologie Moléculaire] Sélection de bactéries

je voulais savoir pourquoi fait on une sélection avec de la kanamycine des bactéries transformées avec un plasmide comportant un gène de résistance à la neomycine.  [...] ah ok, on peut donc utiliser indifferement la kanamycine ou la néomycine.   [...]

Plasmide et gène LacZ

La première étape de l'utilisation des plasmides est la détermination des bactéries transformant (qui ont intégré un plasmide non recombinant) et des bactéries transformant recombinant (qui ont intégré des plasmides recombinant, i.e. contenant le gène luc), par rapport aux bactéries non transformant.  [...] Pour cela on utilise un gène de sélection. Le plasmide ci-dessus possède un gène Ampr, qui procure à la bactérie un caractère de résistance à un antibiotique. l'ampicilline. En milieu contenant de l'ampicilline, seules les bactéries ayant intégré le plasmide pourront survivre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

En générale YFG est couplé à un gène rapporteur (qui permet la sélection des plasmides qui intègrent effectivement YFG). C'est souvent un gène de résistance chez les bactéries. Ainsi lorsqu'on place les bactéries qui ont intégré le plasmide dans un milieu avec antibiotique, ce sont celles qui survivent qui on intégré YFG étant couplé audit gène de résistance à l'antibio.  [...] Pas nécessairement de l'ampicilline. Le choix du marqueur de sélection dépend du plasmide que vous utilisez. Le plus courant est que ce plasmide contient un gène de résistance à l'ampicilline. Quand vous transformez votre bactérie avec votre plasmide, ce dernier lui confère la résistance à l'ampicilline.  [...]

Les colonies satellites dans un milieu aditionné d'Ampicilline

Si tu veux sélectionner les bactéries sensibles à l'amp, tu dois procéder comme ça. (donc pour rappel, tu cherches les bactéries amp sensibles, antibio 2 resistantes, antiobio 3 resistantes cad a dire portant le plasmide ou la résistance a l amp est altérée par un insert (mais les deux autres restent effectives).  [...] Tu fais ta transfo sur l'antibio 2 ou 3 (tu as dis que tu avais 2 autres résistances sur ton plasmide qui ne doivent pas être altérées par ton insert). Ca veut dire que seul les bactéries portant le plasmide (transformées) seront sélectionnées.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

en fait jinsere un gene viral, dans un plasmide -. selection du bon plasmide dans des cellules bacteriennes (a laide de la selection AB), mais l'expression final du gene que je recherche doit se faire dans des cellules animales.  [...] Par pression de selection AB sur les bacteries, je vais pouvoir selectionner uniquement les colonies bact qui ont integrer mon plasmide (qui a un gene re resistance a la selection).  [...]

[Biologie Moléculaire] Le plasmide a t'il l'insert?

Pour savoir si les plasmides (dans la bactérie) ont l'insert, l'idée serait de sélectionner sur néomycine. Mais apparement la bactérie aurait déjà un gène de résistance à la néomycine, donc on ne saurait pas si c'est la bactérie ou le plasmide (avec insert) qui donne la résistance.  [...] Mais là j'ai un problème. la résistance à la streptomycine se trouve sur le vecteur et non sur l'insert. Donc dans ce cas nous sélectionnons simplement les bactéries qui ont un plasmide (avec ou sans insert).  [...]

[Microbiologie] bacterie resistantes

- Lorsqu'on insère un plasmide dans des bactéries, certaines bactéries du lot n'insèrent pas le plasmide et restent donc non résistantes.  [...] En faisant un milieu de culture normal, tu auras donc développement de colonies bactériennes résistantes à ton antibiotique, mais aussi de colonies non résistantes.  [...]

[Microbiologie] Escherichia coli

La sélection d'E.coli comme modèle d'étude vient notamment de l'absence de pathogénicité de la plupart des souches de laboratoires, du temps de génération court (une nuit suffit pour avoir des colonies sur géloses, phase de latence de moins de 2 heures en général) et l'absence de résistance, ce qui permet l'utilisation de gènes de résistance comme marqueur de sélection de plasmide ou de mutagénèse.  [...] Ca ce ne veut rien dire, la dureee de generation est le temps que met la bacterie a se diviser (en min). pour E.coli c'est variable seulon les souches, mais c'est entre 20 min et 40 min.  [...]

Plasmide recombinant

En fait, dans le plasmide, on place souvent un premier gene de resistance à un antibiotique dans la région de recombinaison. Ceci pour pouvoir selectionner les vecteurs recombinants. Faciel et instinctif je dirais.  [...] cette sélection s'effectue en étalant les bactéries transféctées sur une boite d'agar contenant la Tet, toutes les colonies obtenues de cette façon contiennent un plasmide.ces colonies résistantes sont ensuites téstées pr leur capacité de croitre sur un milieu contenent l'Amp.  [...]

Questions sur les éléments d'un vecteur de clonage

-Une fois la transfection effectuée, on doit sélectionner les bactéries ayant bien reçus ce plasmide sur milieu avec antibiotique. Encore une fois, ce fameux codon stop empêche selon moi la transcription du gène de résistance et donc ne permet pas aux bactéries de devenir résistantes.  [...] L'expression des différents gènes contenus dans un tel plasmide est indépendante. Même s'il y a en effet un codon stop après le MCS, il y a des promoteurs indépendants pour chacun des autres gènes comme celui de résistance. Du coup je pense que cela répond a toutes tes questions, sinon tu peux toujours continuer la discussion.  [...]