• Forum - Sec, Extraction, ADN

[Biologie Moléculaire] PCR après tri cellulaire au FACS

je souhaite réaliser un génotypage cellules spécifiques. Je vais donc marquer et trier des cellules au FACS, puis je réaliserai une PCR sur les cellules récupérées. Je voulais savoir dans quel tampon il était préférable de reprendre mes cellules pour réaliser la PCR à la suite.   [...] Le même tampon que celui du tri, puis tu centrifuge tes cellules et tu fais un culot sec si tu veux les stocker à -80 ou alors tu fais directement la lyse puis l'extraction d'ADN.  [...]

protocole d'extraction d'ADN

oui j'ai essayé mais ce que je trouve c des these de doctorat et la partie qui m'interesse il parle brievement de l'extraction d'ADN on a utulisé pour l'extraction la methode X... et quand je cherche la methode je n'y trouve rien, je vais ressayer encore une fois si je tombe sur quelque chose.  [...] La bactérie la plus utilisée en clonage est E. col i. C'est une bactérie gram-. Si vous cherchez un protocole d'extraction d'ADN, la plupart que vous trouverez concerneront cette bactérie.  [...]

Extraction d'ADN

Je cherche à Exprimer mon résultat en volume d'extrait Voilà j'ai calculer une masse de matériel ADN brut (en g d'ADN sec).  [...] Puis je dois déterminer la concentration en matériel brut extrait par litre de culture bactérienne.   [...]

[Biologie Cellulaire] Western Blot ATM phosphorylé

J'ai déjà testé de nombreux protocoles sans succès (méthodes d'extraction différentes, migration sur petit/grand gel, transfert liquide/semi-sec..), donc j'aimerais savoir si quelqu'un possède un protocole précis ou des indications.  [...] Et, ATM est une grosse protéine, très peu abondante. Y a t-il une méthode d'extraction à privilégier de migration et de transfert.  [...]

Precipitation adn plasmidique

Bonjour, après une extraction d'adn plasmidique avec un kit qiagen, je me retrouve avec de faibles concentrations de plasmide. Je souhaterais donc le concentrer un peu afin de pouvoir par la suite le sequencer.  [...] Si tu as de faibles concentration d'ADN je te conseille un entraineur pour precipiter ton ADN sinon tu risques d'en perdre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème transfo...

Et même si je refais la digestion pour la 2e fois aujourd'hui, j'ai une fâcheuse permanence dans les résultats. Je prends toujours mini 10 clones de chaque transfor (ici, 2 transfos, donc 20 clones ont donné leurs plasmides pour la sciences ) et je me retrouve avec exactement les mêmes bandes (même PM et même intensité) à la fin.   [...] Par contre bacillus est un gram+, donc un %GC plus faible que E. coli. Quand je bossais sur une bacterie a faible %GC, j'avais souvent des problemes d'expression (les sequences a haut taux de AT sont souvent reconnues a tort par coli comme etant des promoteurs), voire de mutations, ou de duplications (les ADN/ARN pol de coli n'aiment pas les succession A/T).  [...]

[Génétique] Conservation tissus exploitation ADN

Dans le cadre d'une expérience je dois conserver des tissus de rat (peau) pendant une longue période, j'aimerai par la suite en extraire l'ADN. Je n'ai pas accès à un récipient cryogénique, mais un de mes profs m'a dit qu'en plaçant les tissus dans de l'éthanol au frigo à 4°C cela suffirait pour la conservation des tissus, je suis un peu sceptique mais bon.  [...] Le but de l'expérience c'est aussi de tester la durée de vie de l'ADN (notamment l'exploitation des exons) avec des méthodes de stockage non conventionnelle, c'est pour ça que je voulais avoir vos avis sur les deux méthodes proposées. Ton retour sur la préservation à sec est donc de seulement quelques jours avant dégradation On travaille en collaboration avec la fac de bio et on a eu le droit d'utiliser des tissus de chien mort conservés (4°c) depuis plusieurs années et l'ADN était toujours exploitable.  [...]

La fibromyalgie, ses causes, ses traitements - Page 9

C'est ainsi que fonctionne la médecine. l'hypothèse diagnostique la plus probable est retenue puis corrigé en fonction de l'évolution et les traitements adaptés en fonction des réponses et des réactions.   [...] Cependant, je suis un peu dégoûté de la médecine locale... J'estime que mettre 4 mois pour ouvrir un vidal pour comprendre le mécanisme d'une réaction médicamenteuse en ayant une parfaite connaissance du traitement, me semble totalement incroyable.   [...]

[Zoologie] Ténébrion ou ver de farine

Un truc intéressant avec ces bestioles. apparemment lorsque leur densité augmente ils deviennent plus sombres, le taux de mélanine de leur cuticule augmentant. Apparemment c'est lié au fait que la mélanine a une action protectrice contre les infections, qui sont plus probables lorsque la densité augmente (bref c'est une mesure prophylactique ).   [...] - la tête et le thorax sont adultes mais l'abdomen reste segmenté. La bête vit, mange et se déplace, mais je me demande ce qu'il en est de la digestion et de la resproduction.   [...]

[Biologie Moléculaire] Difficultés pour solubiliser de l'arn

Suite à une extraction d'ARN totaux à partir de larves de Trichinella (nématode) j'ai des difficultés pour ressolubiliser mon ARN. Mon protocole est basé sur une extraction classique au phénol-chloroforme et à la fin un lavage à l'éthanol 75% et séchage. Le séchage de mon culot s'est fait en étuve à +37°C puis resupension dans de l'eau Rnases free.  [...] En fait j'ai réussi à ressolubiliser une partie de mon culot en refaisant une extraction phénol-chlo. Néanmoins, il me reste une partie insoluble. Pensez-vous que pour faire ma banque d'ADNc je devrais refaire une extraction où je peux travailler avec mon culot dissout En gros, j'ai peur que ne se sont dissoutes que certaines catégories d'ARN, lesquelles je ne sais pas mais c'est possible.  [...]