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[Biologie Cellulaire] technique de retard sur gel et immunoprécipitation de chromatine

J'ai du mal a comprendre la différence ( s'il y en a une ) entre la technique de retard sur gel (EMSA) et celle de l'immunoprécipitation de chromatine ( ChIP). Pour moi les deux permettent de déterminer s'il y a une interaction physique entre ADN et la protéine.  [...] pour résumer, en EMSA on connait la séquence et on peche des protéines (on peut en déterminer la nature par diverse méthodes ensuite).  [...]

[Biologie Moléculaire] Retard sur gel

Sinon, en absence d'anticorps, on peut aussi utiliser un extrait protéique qui ne possède pas la la protéine en question (Knock down, ou KO s'il est disponible), et observer une diminution / absence du retard.  [...] moi je n'ai pas utilisé de retard sur gel mais pas mal d'électrophorèse 1D et 2D et la technique que j'utilisais pour caractériser les protéines c'était la spectrométrie de masse. Ca me semble être la méthode de choix pour identifier une protéine ab initio.  [...]

protéomique

La technique permet la séparation des protéines et l'obtention de profils très semblable aux profils de gel 2D classique, sauf qu'ici à la place des bandelettes de l'IEF, on utilise un gel 1D (SDS PAGE par exemple), on coupe la bande qui nous intéresse, puis on la fait migré sur un autre gel toujours en 1D.  [...] Il y a plusieurs possibilités. Par exemple on peut déposer des protéines issues de complexes obtenus par EMSA (=gel retard, gel shift). Cela permet de caractériser une interaction protéine-ADN.  [...]

Gel Shift : problème avec la compétition

J'essaie de démontrer que ma protéine (régulateur cytoplamique de système à deux composants) se fixe sur sur une séquence spécifique d'ADN. La protéine a été purifiée par une queue histidine que je lui ai ajouté. Les sondes que j'utilise sont des PCR purifiées sur gel.  [...] J'ai fait plusieurs gels et j'obseve un shift avec ma protéine, en fait j'ai testé 4 quantités différentes de prot et quand j'augmente la quantité j'obtient un retard plus important.  [...]

Savoir les symptômes du sida

En France les tests de diagnostic, en terme de législation excluent une contamination à 3 mois, on va dire que c'est un consensus qui n'a rien à voir avec les techniques de dépistages... cela correspond juste à une cinétique d'apparition des anticorps et maintenant les tests incluent un Ag.  [...] Tout est question de probabilité. Techniquement il est possible de dépister une infection au VIH dans les premiers jours de la contamination sauf que les tests utilisés sont sur des anticorps qui respectent une cinétique d'apparition, par conséquent pas de tests interprétable avant 3 semaines si on utilise que des Ac.  [...]

[Biochimie] retard sur gel

effectivement, je vois bien mes oligos marqués qui migre à la mm vitesse en présence et en absence de ma protéine et je pense que je dois vérifier certains paramètres de ma technique.  [...] Pourquoi ne pas essayer avec un extrait protéique contenant votre protéine que vous savez active, et de tenter un supershift ou une inhibition avec un anticorps spécifique.  [...]

delai depistage vih - Page 2

Dans ce cas, compte tenu du retard possible de l'apparition des anticorps, le suivi sérologique du sujet exposé doit être envisagé sur une année.  [...] Les tests sont certes plus sensibles mais il reste, d'une part, un seuil sous lequels les anticorps, la charge virale ou les antigènes ne sont pas détectés et d'autre part que le délai d'incubation avant l'expression de ces marqueurs n'est toujours pas connu, de la même façon que le délai de déclaration de la maladie. Ainsi que tous les cofacteurs pouvant influer.  [...]

[Biologie Cellulaire] Electroporation neurones

Pour cette technique il faut un appareil (l'Amaxa) que je n'ai pas ( et qui coute extrêmement cher) et il faut acheter des réactifs bien particulier qui ne sont pas donnés non plus.  [...] Désolé pour le retard et d'avance désolé pour la réponse car ils n'utilisent que la technique de nucléofection (ils ont réussi à avoir la machine).  [...]

[Immunologie] ELISA coating et conservation

Le problème, c'est qu'en attendant de trouver des résultats corrects sur mes plaques tests, je prends du retard sur mes échantillons à analyser... Et j'utilise des anticorps pour rien, qui coûtent la peau du c.  [...] Pour la méthode de séchage au séche cheveux, je te la déconseille. Pourquoi Parce que les protéines se dénaturent au alentour de 44°C. Avec ton séche cheveux tu n'as aucun moyen de contrôler ta température. Donc y a des risques que tu abimes sans t'en rendre compte tes anticorps.  [...]

nutriments et conséquence

- sinon il y a les coenzymes qui se fixent faiblement à l'apoprotéine, on les appelles cosubstrats. Ils se baladent souvent entre enzymes pour transporter. des électrons, des groupements chimiques, etc. par exemple. le NAD ou Nicotinamide Adénosine Dinucléotide dérivé de l'acide nicotinique alias vitamine B3, ou l'acide ascorbique ou vitamine C.  [...] Normalement, les glandes de la partie supérieure de l'estomac sécrètent les sucs gastriques ainsi que le facteur intrinsèque, une protéine nécessaire à l'absorption de la vitamine B12. Lorsque ces glandes gastriques ne produisent plus suffisamment d'acides gastriques et de facteur intrinsèque, l'anémie pernicieuse apparaît.  [...]