• Forum - Restrictions, Enzyme, Fragments, ADN

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

[Pour une PCR, on ajouter parfois des enzymes de restriction pour cliver l'adn, selon exactement le même principe décrit ci-dessus, il n'y a simplement pas d'insert de gène, donc pas de source de confusion any more normalement^^].  [...] pour le protocole de clonage, la première étape est la création d'une banque d'adn (extraction adn, digestion par une enzyme de restriction puis ligation de ces fragments dans des plasmides portant les sites de restrictions de l'enzyme restriction choisie).  [...]

[Biologie Moléculaire] Identification d'un gène déterminé

j'imagine qu'il faut découpé ce gène dans la bactérie 1, à l'aide d'enzyme de restriction, puis dans le PCR ajoutez ajouté des. ddatp, ddttp, ddctp, ddgtp fluorescent afin de pouvoir avoir une séquence de ce gène contenue dans la bactérie 2, si la bactérie 2 à ce gène.  [...] On veut vérifier si cette séquence se trouve dans ADN 2 donc, il faut que cette séquence soit le primer de l'ADN 2 lors du PCR à l'aide d'enzyme de restriction on va découper ce qu'il y'a autour pour n'avoir que la séquence ( je ne sais pas si il existe des enzymes de restrictions qui peuvent découper cette suite, mais là ce n'est qu'un exemple).  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse dirigée qui ne fonctionne pas

L'idée maintenant c'est d'amplifier un fragment plus court (environ 3Kb) compris entre deux sites de restriction uniques (mais toujours autour de la zone qui m'intéresse bien entendue). Donc pour cela je design 2 paires d'oligos et réalise 3 PCR successives.  [...] La plus part des enzymes de restrictions ont besoin de quelques bases de part et d'autre du site pour se fixer a l'ADN si ton site est exactement a l'extremité de l'ADN beaucoup d'enzyme ne couperont pas du tout. ca va etre super galere.  [...]

[Biologie Moléculaire] problème de primers

Une autre approche serait de sous-cloner des fragments de ta région de 11 Kb (ex. 4 fragments de 2.75 Kb)...et de jongler pour recloner un fragment final de 11 Kb.  [...] jongler. une fois que tu as cloné des sous-fragments il faut les réassocier c'est à dire trouver un jeu d'enzymes de restrictions adéquat (sites uniques).  [...]

Différences d'ADN entre les ètres vivant ?

Je suppose que si l'on fait intervenir une série d'enzyme de restrictions et qu'on fait une électrophorèse, on pourrait voir se détacher des gênes inattendus (chez l'homme) d'autant plus facilement que l'espèce est éloignée. Mais n'ayant jamais pratiqué ce genre d'analyse (et je l'ai vu faire en laboratoire qu'une seule fois) j'ignore si ce serait frappant ou pas (ou pour reprendre la métaphore d'Elianix, j'ignore si on peut se rapprocher facilement plus près pour mieux voir ).  [...] Oui, bien sûr, il doit exister des enzymes de restriction très spécifiques à l'homme (je ne suis pas sûr que ce soit suffisant. Distingueraient-ils des grands singes par exemple Plus d'info si un biologiste passe par là).  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

- Et il faut au moins 2 sites de restrictions situés entre un promoteur et un terminateur permettant ainsi d'inserer l'ADN recombinant.  [...] Tout a fait, si tu as une carte de restriction tu peux couper a la base pres. Il faut juste avoir un site bien placé. Comme ça tu peux supprimer la fin de ton ADNc et le rabouter a ton autre gène, sous réserve de sites de restrictions bien placés sur l'un et l'autre des fragments et qui permettent un assemblage en phase.  [...]

[Divers] Mémoire M1: ce qu'il faut faire ou pas

Je conseille à mes étudiants de bien détailler le matériel et méthode et d'expliquer autant que possible la raison d'être de chaque chose. En revanche il s'agit d'un exercice froid où l'on expose des expériences sans forcément mettre de lien entre elles, ceci est le rôle de la partie résultats ou une logique doit ressortir.   [...] Bon, j'ai changer quelques trucs et j'ai créé une partie Appendix que je mettrais à la fin. J'y ai mis pas mal de chose comme les séquences des primers que j'ai utilisé, les résultats de mes prédictions pour les fragments après restrictions enzymatiques avec BamI et XhoI, et les recettes des milieux de cultures, et solutions.  [...]

[génétique] L'empreinte génétique et le test de paternité

En effet, l'ADN est composé d'une succession de bases (A-C-G-T). Certaines des enchainements de bases permettent de former des proteines (=gènes), mais certaines ne codent pas pour des proteines. Certaines de ces regions non codantes sont spécifiques à chaque individus. c'est l'empreinte génétique.  [...] Ca ne veut pas dire pour autant qu'ils ont le même code génétique, car l'empreinte génétique compare seulement certains endroits précis du génome (au moyen d'enzymes de restrictions qui coupent l'ADN à des endroits déterminés).  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage pCR sequnsage

je ne sais pas quand est ce on utilise les enzymes de restrictions sur la totalité de l adn pour obtnir des fragements quand va cloner dans un vcteur (bacteri par exmpl) et quand est ce que on cherche un seul fragements d adn pour le clonr et comment on procede pour le chrcher.  [...] si vous souhaitez une réponse commencez par les formules de epolitesse (bonjour et merci n'apparaissent nulle part sur votre sujet) et par expliquer calmement votre problème, dans un francais compréhensible (c'est bourré de fautes).   [...]

[Biotechnologie] An efficient TALEN mutagenesis system in rice

5. Excise the restriction enzyme-insensitive fragments of the same size as the undigested DNA fragment, and purify them with a DNA gel Extraction kit as described by AXYGEN.  [...] Je suppose que les séquences ciblées par les enzymes de restrictions participent du transgènes, auquel cas on digère la séquence ADN et on regarde ce que ça donne par PCR pour détecter les inserts.  [...]