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[Génétique] Questions à propos de la thérapie génique

Ce document parle aussi de gènes de sélection qui contiennnent des sites de restriction () mais je ne pense pas que ce soit de notre niveau.  [...] Concernant les sites de restriction, ce sont des séquences d'ADN double brin qui sont reconnues et clivées par des enzymes bactériennes.  [...]

Proteine de Fusion Besoin d'aide

j'ai donc utilisé les enzymes de restriction coupant au niveau du sites EcoRI de pGEX. afin d'inserer mon gène EGFP qui possède dans sa partie MCS, un site de restriction EcoRI egalement. mais je ne sais pas comment couper, apres le gène EGFP pour qu'il soit complementaire de la sequence de l'extremité colante correspondante sur pGEX.  [...] doit on utiliser les amorces ou doit ont couper tout simplement pEGFP-N1 a Not 1 ou XBA1 situé quelque nucleotide apres EGFP. sachant que il existe un site de restriction Not1 sur pGEX-4T-2.  [...]

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

Pour ce faire nous allons réaliser une PCR du gène Tet avec deux amorces contenant des sites de reconnaissances pour les enzymes de restriction XbaI et HindIII. Visiblement les amplicons obtenus possèdent à chaques extrémités le site de reconnaissance pour ces enzymes de restrictions et une Adénosine (d'ailleurs là j'ai pas compris d'où elle vient).  [...] D'où vient l'A Tout simplement, on l'a rajouté au niveau des oligos Tu peux carrément pousser plus loin si tu as besoin, en ajoutant des sites de restriction par le biais des oligos. Ca s'appelle PCR d'assemblage.  [...]

[Biologie Moléculaire] Urgent Clonage

J'utilise sérial cloner, j'ai identifié les sites de restriction, mais je ne sais pas comment m'y prendre, comment choisir des oligos, introduire des sites de restriction... ETC bref je suis Out -.  [...] 2 de nucléotides (acides aminés = protéine...), autour de 20, plus la partie qui contient le site de restriction, plus quelques uns pour permettre la bonne digestion par l'enzyme. une trentaine en tout.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fréquence de sites de restriction

Ca serait bizarre de rediviser le nombre théorique de site de restriction parla probabilité d'avoir un site de restriction. Je pense que, comme l'a dit jmbowie, il faudrait voir s(il ne faut pas considéré une digeston ménagée ou tout les sites ne sont pas clivé.  [...] * on divise le nombre total de sites de restriction (ici, on nous dit que c'est 100 pour Sau3A) par ce facteur et on aura le nombre de sites qui ne seront potentiellement pas digérés.  [...]

PCR clonage

Tu as calculé comment ton Tm pour tes amorces avec sites de restriction Tu as peut être tout simplement un problème d'hybridation de tes amorces à cause d'un Tm inapproprié.  [...] mais je comprends pas uen chose, quand on veut rajouter les sites de restriction, qu'elles sont les mesures a prendre en consideration pour ne pas tomber dans ce genre de probleme.  [...]

Carte de restriction

Combien de sites de restriction avez-vous besoin dans le plasmide A pour générer les 2 fragments de 3000 et 500 bp avec une seule et unique enzyme de restriction.  [...] La réponse se trouve dans l'explication juste au dessus. Essayez de réfléchir en quoi le changement d'une base dans le plasmide pourrait créer un nouveau site de restriction surnuméraire.  [...]

Y a-t-il une différence entre un spécimen ogm et un non ogm ?

ps. dans le pire des cas, on peut toujours, une fois le transgène intégré, induire des InDels dans nos sites des restriction histoire d'effacer les traces (non). Donc j'ajoute cette condition à ma question. une seule manipulation doit être réalisée, donc seulement l'intégration du transgène (pas de manipulations ultérieures pour effacer les traces).  [...] Non car les sites de restriction sont quasiment universels à ma connaissance (même si tous les organismes ne produisent pas toutes le enzymes qui vont être spécifiques de ces sites).  [...]

[Biologie Moléculaire] logiciel clonage

Pour rajouter des sites de restriction, tu regardes dans ton logiciel de manipulation de séquences ou dans le catalogue NEB et tu l'ajoute en 5'. N'oublie pas le clamp aussi.  [...] Enfête ce que je trouve chiant c'est de devoir regarder sur un catalogue et de plus j'ai toujours du mal à rajouter mon site de restriction sur mon primers reverse(je dois faire fonctionner mes neurones pendant au moins 10 min.) c'est pour sa que je pensais à logiciel qui ajoute direcetement les sites de restrictions.  [...]

[Génétique] les vecteurs

s'il vous plait est ce que le site de restriction (au niveau du vecteur) = site d'insertion d'une séquence d'un gene (resistant à l'antibiotique par expl).  [...]