• Forum - Résistance, Chromosome, Plasmide

[Biologie Cellulaire] A quoi sert le co-transfert avec un vecteur de résistance à un antibiotique

C'est là qu'intervient le deuxième plasmide avec le gène de résistance. En fait, lorsque l'on fait une co-transfection, on considère que si le plasmide A entre dans la cellule, alors le plasmide B rentre aussi (en respectant un ratio équivalent).  [...] La meilleure méthode est quand même d'avoir un gène de résistance dans le plasmide où tu as ton gène d'intérêt, ça te permet de minimiser le nombre de clones faux-positifs (uniquement résistant et sans gène d'intérêt).  [...]

[Génétique] Plasmide F et résistance aux antibiotiques

En effet ce plasmide est transmis par une bactérie F+ donneuse à une bactérie F- receveuse qui devient à son tour une bactérie F+ donneuse potentielle. Cependant aucun gène de résistance à un antibiotique n'est porté par le plasmide F.  [...] Le truc est que les plasmides sont trop petits pour ça Il y a des phages, comme T4, qui mange, s'il n'en a pas assez, il va ailleurs sur le chromosome et continue, etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination transformation

J'ai fais une transformation en bactéries Top10F' pour effectuer une recombinaison homologue entre un plasmide conférant une résistance ampicilline et un ADNg. A l'issu de la transformation de petites colonies sont apparues sur la gélose après 24h d'incubation...jusque là tout est normal.  [...] Comme une colonie satellite alors. Sinon, tu peux regarder vers les espèces naturellement résistances à l'ampicillines comme les Klebsielles. D'autre part, il existe des gènes de résistances chromosomiques aux B-lactames.  [...]

Plasmide et gène LacZ

Pour cela on utilise un gène de sélection. Le plasmide ci-dessus possède un gène Ampr, qui procure à la bactérie un caractère de résistance à un antibiotique. l'ampicilline. En milieu contenant de l'ampicilline, seules les bactéries ayant intégré le plasmide pourront survivre.  [...] Ensuite pour différencier les transformant des non transformant, on utilise un autre gène de sélection, par exemple le gène LacZ (non présent ici) qui a la propriété de produire une substance bleue s'il est transcrit et traduit. Le gène luc étant inséré au milieu du gène LacZ, celui-ci ne peut être fonctionnel que dans le cas où le plasmide ne serait pas recombinant.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Pour choisir un vecteur, il te faut regarder la force de l'origine de réplication (qui détermine le nombre de copies de plasmide dans la bactérie), les résistances aux antibiotiques (sélection des bactéries intégrant le plasmide), la présence d'autres marqueurs de sélection comme la beta-galactosidase, le type de système d'expression (promoteur euca/procaryote, RBS pour traduction chez procaryote,  [...] J'ai moi aussi de la difficulté a trouver un vecteur approprié, Et Je ne comprend pas pourquoi le bon vecteur dans cet exemple serait PinPoint xa-1 Selon ce que j'ai vu il ne possede pas de sites de restriction communs avec la sequence d'ADNc dans sa region du gene de resistance Je ne comprend pas d'ailleurs pk le site de restriction doit se trouver dans la sequence de resistance a l'antibiotique et non ailleurs dans le plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Système Toxine-Antitoxine

Un système toxine-antitoxine (TA) est particulièrement utilisé par les bactéries et les archeas, en particulier pour prévenir la perte d'une résistance au fil des mitoses. Le système TA étant composé d'une toxine relativement stable et d'une antitoxine instable (mais en nombre suffisant pour inactiver la toxine en temps normal), si le plasmide portant le gène responsable de ce système est perdu ou mal copié avant la mitose, la cellule fille qui n'en contiendra pas va mourir, car l'antitoxine va se dégrader, mais pas la toxine.  [...] Les systèmes TA peuvent,en effet, se trouver sur des plasmides mais aussi sur d'autres éléments génétiques mobiles tels que dans des phages ou des transposons. Ils peuvent aussi se localiser sur le chromosome. Ceci suggère donc une dissémination par transfert horizontal.  [...]

Insertion d'un promoteur sur un vecteur plasmidique

Je m'interroge quant à savoir la technique qui pourrait être employée afin d'insérer un promoteur viral afin de permettre l'expression d'un gène de résistance dans une cellule eucaryote. Il est clair que sa présence est indispensable, mais comment l'isoler et l'ajouter (sites de restriction).  [...] Il y a beaucoup plus simple. Tu choisis un plamside qui possède déjà le promoteur. les catalogues des fournisseurs sont remplis de plasmides avec le promoteur de ton choix, le gène de résistance, les terminateurs, etc... Toutes les combinaisons sont possibles.  [...]

[Biochimie] TIPE paroi des végétaux

Salut, je mis connais pas encore tres bien en biologie cellulaire chez les végétaux, mais je pense que le fait de provoquer une différence de flux osmotique entre le cytosole des cellules et le milieu extracellulaire serais un bon moyen de prouver la résistance de leurs paroies à un choc hyposmotique.  [...] ou alors peut etre tester leur resistance à l'étirement pour connaitre son élasticité tu calcule L et puis ensuite delta L après l'étirement pour trouver la déformation e= deltaL/L. Tu le fait sur plusieur plante comme tu détermine leur élasticité et donc leur teneur en protéine riche en helice alpha.  [...]

Les vaccins anti-grippe sont de moins en moins efficaces...

Dans le monde, le nombre de virus résistants n'était que de 0,4 % entre 1994 et 1995, et il n'a cessé de croître pour atteindre 12,3 % entre 2003 et 2004. Cette résistance a commencé à augmenter en l'an 2000 en Chine, avec un pic de résistance entre 2002 et 2003 (74 % de résistance).  [...] Ces cas de figure inquiétants pourraient se reproduire avec les nouveaux antiviraux. Pas étonnant que le laboratoire Roche participe ainsi à un réseau de surveillance international qui guette en permanence l'émergence de résistance au Tamiflu ou au Relenza (antigrippe de GlaxoSmithKline). On ne sait jamais.  [...]

rats KO

Enfin certes la recombinaison homologue est théoriquement possible chez tous les mammifères mais à condition que l'on puisse maintenir les cellules ES de l'espece en culture, ce qui n'est pas le cas chez le rat il me semble...(car on transfecte les cellules ES par un vecteur contenant le marqueur, on selectionne les cellules ES ayant intégré le vecteur et on les réinjecte dans un blastocyte que l'on implante chez une mère porteuse).   [...] Le vecteur contient des gènes de résistance aux antibios, ou alors des gènes permettant la prototrophie pour un élément (acides aminés essentiels en général). Mais lorsque l'on fait du KO chez la souris on utilise 2 marqueurs.  [...]