• Forum - Réplication, Marqueur, Sélection

[Biologie Moléculaire] Clonage

On a coupé l'ADNg avec BamHI et le sous fragment BamHI-BamHI qui confere la thermoresistance a des levures Ts ura- a été sous-cloné au site unique BamHI du vecteur YIp(sans origine de replication) qui contient le gene URA+ comme marqueur de selection.On recupere deux transformants URA3+,Tr1 et TR2,dont on extrait l'ADN.  [...] Cet ADN est digéré par BglII(le plasmide YIp ne contient pas le site BglII et le sousfragment BamHI-BamHI contient un site BglII).L'ADN digéré est analysé par Southern en utilisant comme sonde radioactive le fragment BanHI-BamHI d'une part et le plasmide YIp sans insert d'autre part.Voila les resultats de l'autoradiographie.   [...]

[Biologie Moléculaire] conversion d'un plasmide

J'aimerai savoir si il était possible d'ajouter une origine de réplication et tout de suite après un marqueur de sélection afin de pouvoir sélectionner des clones.  [...] tu peux songer a foutre une origine de réplication virale type SV40 par contre je sais ce que ca donne en système de production.  [...]

[Biotechnologie] vecteurs pGEMT -TOPO- Pbluescript - lambdaZAGII

Nous avons étudiés les différents moyens de cloner de l'ADN et en particulier l'utilisation de plasmides et de phages et des vecteurs dérivés de ces outils.   [...] j'ai compris que les vecteurs types pbluescript, pGEMt et Topo possèdent. les caractéristiques des plasmides (origines de réplications plasmidiques, 1 ou plusieurs gènes de sélection c'est à dire de résistances à un antibiotique, un gène marqueur l'opéron lactose qui lorsque l'ADN d'intérêt sera inséré ne permettra plus la synthèse de la beta galactosidase et donc la formation de colonies bleues sous l'action du Xgal et de l'IPTG) des caractéristiques phagiques comme une origine de réplication phagique F+ ou F- avec réplication dans le sens de l'opéron lactose ou dans le sens opposé ( lié au sens d'insertion de l'ADN d'intérêt ou bien aux caractéristiques du phage M13 de ne synthétisé qu'un brin d'ADN dans le cas ou l'infection est réalisée avec un phage helper ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Question sélection assistée par marqueur moléculaire

[Biologie Moléculaire] Question sélection assistée par marqueur moléculaire.  [...] je m'intéresse à ce sujet mais j'avoue ne pas tout saisir. Après un croisement on utilise des marqueurs (microsatellites par exemple) pour caractériser une polymorphisme aux niveaux du génomes entre deux phénotypes différents.  [...]

[Génétique] Transfert de matériel génétique chez les bactéries

Dans le contexte du transfert de matériel génétique, un marqueur de sélection est le plus souvent un gène conférant une résistance à un antibiotique défini (par exemple la kanamycine).  [...] En effet, les bactéries qui n'ont pas le marqueur de sélection présent sur le matériel génétique transféré sont sensibles à l'antibiotique et meurent quand celui-ci est ajouté au milieu de culture.  [...]

[Génétique] gène pleïotrope

En revanche la particularité de la levure est de faire 99% de recombinaison homologue. Il suffit donc d'amplifier par PCR un marqueur de selection (genre URA3, LEU2 etc...) avec des amorces dont les 20nt en 3' s'hybrident sur le marqueur de selection, mais dons les 50nt en 5' sont identiques au gene que l'on veut déléter.  [...] Apres PCR on transforme directement les levures par le produit de PCR, qui va s'intégrer au locus par recombinaison homologue. On a donc cibler un gene specifique en le remplacant par un marqueur de selection.  [...]

[Biotechnologie] la création variétale

La sélection par marqueur assistée est une innovation des techniques classiques de sélection qui permet un gain de temps considérable (je crois que ce sont environ 4 à 5 backcross qu'il faut faire en moins). Le principe du marqueur moléculaire est d'utiliser des portions génomiques qui sont très rapidement observables par des techniques de PCR-électrophorèse.  [...] L'objectif du sélectionneur, le plus souvent, est d'éliminer les séquences d'ADN parasites de la variété donneuse autour du QTL d'intérêt, pour affiner son introgression. c'est-à-dire n'introgresser que le QTL, avec un objet de pureté de 97%. Les marqueurs sont donc un outil de quantification idéal, puisqu'ils permettent de suivre la disparition progressive au cours des recombinaisons de certains marqueurs éloignés du QTL, et de la conservation de ceux qui sont les plus proches.  [...]

[Biologie Cellulaire] Transmission des mitochondries

Mais il a aussi été montré chez les chloroplastes qu'un transfert vers le noyau se faisait sans intermédiare RNA. ils avaient mis un intron dans le gène du marqueur de sélection, et après transfert l'intron était toujours là dans le noyau.  [...] Je me suis mal exprimé. Un gène de marqueur de sélection interrompu par un intron. On transforme le chloroplaste. Et plus tard on se rend compte qu'il y a eu un transfert du chloroplaste vers le noyau et que le gène qui se retrouve dans le noyau a gardé l'intron. Il n'a donc pas été rétrotranscrit.  [...]

sélection de transformation plante

Comment expliquer que souvent, quelques plantes sauvage arrive a survivre sur un milieu de selection visant normalement justement à selectioner les plantes transformés (càd presentant le marqueur de selection approprié. resistance a un antibiotique en général).  [...] ben je pense tout simplement que dans la population sauvage des mutations aléatoires ont abouti à un allèle rendant l'individu résistant.   [...]

Obtention d'un homozygote par transgénèse avec Agrobacterium Tumefaciens

Pour l'instant la seule procédure qui me vient à l'esprit serait de réaliser une double infection avec un premier T-plasmide porteur d'un marqueur de sélection et du gène d'intérêt, de sélectionner les recombinants puis de réaliser une deuxième infection avec un deuxième T-plasmide porteur d'un marqueur de sélection différent du premier et du même gène d'intérêt.  [...] Les individus homozygotes pour le gène d'intérêt transféré seraient alors ceux porteurs des DEUX marqueurs de sélection (par exemple résistence à la Kanamycine et une protéine de fluorescence).  [...]