• Forum - Région, Séquence, Mutation

[Génétique] principe des études moléculaires

Je vais essayer d'amorcer le problème, quelqu'un pourra toujours me compléter ensuite. En effet pour connaitre avec précision une mutation, on peut réaliser une PCR avec des amorces encadrant la région considérée, puis faire un séquençage. Toutefois, le séquençage n'est pas absolument nécessaire et beaucoup d'autres techniques permettent de détecter une mutation en s'en passant.  [...] Pour l'analyse d'une mutation portant sur une région de l'ADN inconnue, on peut prendre une amorce hybridant sur une séquence connue adjacente à cette région. On peut alors utiliser la technique de marche sur le chromosome. on réalise un séquençage qui permet de connaitre une partie de la région inconnue.  [...]

Mutation?!

La vieille tradition de ne regarder que les mutations dans la sequence codante viens a la fois d'une raison technique, ou avant on avait bien plus facilement acces a cette sequence qu'aux sequences regulatrices...et aussi probablement a l'habitude de considerer comme plus importante la relation sequence-structure-fonction des genes et proteines pour comprendre les maladies.  [...] Les mutations fonctionelles sont rares. maintenant sur une region promotrice de parfois plusieurs dizaines Kb, il est tres difficile de savoir quelle mutation est importante ou pas. Pour trouver une mutation il faut partir d'une sequence qui n'en a aucune, or si chez un patient atteint d'une maladie, tu sequences la region et tu trouves 50 mutations, tu ne va pas savoir si elles ont un effet ou pas. Du coup tu as perdu ton temps.  [...]

[Génétique] Mutation affectant expression d'un gène

Je ne suis pas vraiment expert en levure alors je ne peux pas vraiment t'aider. Je travaille sur un parasite et je ne vais pas dire que dans ce cas on séquence tout de suite mais c'est pas loin lol.  [...] Il s'agit de S. cerevisiae, donc son génome a déjà été entièrement séquencé. Il faudrait donc analyser tout le génome du mutant en comparaison au génome normal pour détecter l'endroit de la mutation.  [...]

Génétique

C'est le cas d'une mutation qui touche le promoteur de hTERT (la sous-unité catalytique de la télomérase humaine) sous l'influence d'UV.  [...] Il y aussi l'exemple des bornes introniques il me semble qui lorsqu'elles sont touchées changent pas mal de choses, enfaite ma question venait d'une autre question. Le variant... est une mutation probable car il affecte le promoteur du gène... c'était un vrai/faux et la réponse était faux alors je suppose que la réponse venait du fait que mon prof considère qu'une mutation probable a lieu lorsque l'on modifie Directement le message exprimé sans agir via le promoteur.  [...]

[Génétique] splicing+mutation

Ces 2 soeurs qui sont également malade posséde la même mutation mais hétérozygote ok super. Le problème et que je trouve pas l'effet qu'elle produit sur le cDNA, j'ai séquençé toute la région cDNA aprés la mutation et rien je ne trouve ni délétion ni retention intronique.  [...] L'ARN de ce patient me semble pas instable car on à comme même reussis à RT et amplifier assez facilement par contre j'ai pas amplifié le cDNA en entier (environ 5000pb)certaines parties du cDNA manque au séquençage (cause spécificité des amorces) mais ces parties sont du côté 5' de la mutation donc j'imagine mal un mauvais épissage avant cette mutation, mais bon il faut que j'optimise les primers pour tout amplifier pour être sure parceque parfois une mutation peut apparaitre comme par surprise aprés la transcription.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutation

A ma connaissance, il peut y avoir une région régulatrice dans le premier intron, en 5'UTR, donc si cette séquence est mutée, ça peut entrainer des effets sur la régulation de l'expression du gène. De plus, si une mutation affecte un site accepteur ou donneur, ça peut empêcher l'épissage d'avoir lieu.  [...] En théorie donc, la phase n'est pas altérée et la séquence de la protéine non plus. En pratique, cette mutation empêche la liaison séquence spécifique du régulateur d'épissage SRSF1. Cette absence de liaison par SRSF1 aboutit à une épissage aberrant dans lequel l'exon en question est exclu du transcris, si bien que la protéine produite est déficiente.  [...]

[Génétique] Diagnostic mutation autosomique récessive

l'ADN du patient est extrait à partir d'un prélèvement de sang veineux. La séquence du gène CFTR étant connue, il est possible de synthétiser deux amorces oligonucléotidiques de part et d'autre de la région de l'exon 10 où se trouve potentiellement la mutation F508del.  [...] Une réaction de PCR permet l'amplification de cette région, que celle-ci soit normale (absence de la mutation deltaF508) ou mutée (présence de la mutation). La distinction entre les trois génotypes possibles (N/N, F508del/N ou F508del/F508del) peut être obtenue par électrophorèse sur gel de polyacrylamide et visualisation des produits de PCR aux U.V.  [...]

[Biotechnologie] Analyse FISH

Donc une sonde sensée s'hybrider à la région WT s'hybriderait mal à la séquence comportant une mutation ponctuelle, pas du tout en cas de délétion, on obtiendrait plusieurs signaux en cas de duplication...etc.  [...] Je crois que c'est pas mal utilisé pour les maladies génétiques dont la même mutation est trés souvent retrouvée ( mucoviscidose..) Mais la technique s'aplique bien aussi à des approches plus fondamentale.  [...]

[Génétique] ADN codant/ non codant

La définition d'un gène est. séquence d'ADN transcrite en ARN. En ce sens, tous les gènes sont codants. Il n'y a pas à chipoter ou se grater la tête, c'est comme ça et pas autrement.  [...] Reste que l'on peut étendre la région d'un gène à la région qui régule l'expression de la séquence codante. On parle de région promotrice (de la transcription). Ainsi on peut décomposer un gène en séquence codante (région transcrite) et en séquence non codante (région promotrice non transcrite). Est ce de cela que vous parlez.  [...]

Edition de l'ARN - Mécanismes?

Le terme édition de l'ARN (RNA editing) désigne un certain nombre de mécanismes qui ont en commun d'entraîner des changements de la séquence d'un ARN par rapport à la séquence génomique (ARN ou ADN).  [...] Les ARNg permettent d'éviter l'insertion ou la suppression d'un mauvais nombre d'uridines qui conduirait à un cadre de lecture non-traduisible. Ils possèdent une séquence complémentaire de la région éditée qui détermine le nombre précis d'uridines à ajouter ou à supprimer.  [...]