• Forum - Rapporteur, Fluorescent, évolution

[Biologie Moléculaire] PCR conventionnel et PCR en temps réel

DAns la PCR en temps réel on ajoute un rapporteur fluorescent qui permet d suivre l'évolution du bins à chaque itération. Il y a donc lecture en continu, alors que pour la PCR classique, on n'a le résultat qu'à la fin.  [...] On peut mentionner également qu'il existe plusieurs variantes de real time PCR, celle qui utilise les agents intercalants tels que le BET et la cybrGreen, et d'autres qui utilisent des sondes fluorogeniques tel que les sondes TaqMan et les amorces scorpion, dans les deux cas l'évolution de l'amplification est visualisée en temps réel dans l'écran du lightcycler.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western et révélation bandes

Dans chacun des cas l'extraction est réalisée à différents temps t. Le rôle de l'hepcidine permet l'internalisation de la ferroportine et sa destruction. Donc en comparant les 2 gels (via la comparaison des bandes) on peut déterminer où se trouve la ferroportine et l'évolution de sa quantité (intensité des bandes).  [...] Mon problème est d'un part la révélation, en effet on révèle par chémoluminescence car le gène de la ferroportine est couplé à la GFP (gène rapporteur et fluorescent naturel). Ce qui me pose pb c'est que l'on utilise un kit ECL après action d'un Anticorps II radioactif anti GFP alors qu'on pourrait détecter directement la GFP via excitation et émission (car il émet une lumière verte).  [...]

[Biochimie] recombineering...

effectivement, car l'ARN est transcrit, puis épissé (c'est a dire que des morceaux sont enlevé) et pour finir, il reste dans la cellule... donc il faut faire attention ou on place le gène rapporteur, pour éviter de le perdre.  [...] je ne connais pas la proportions d'ARN qui n'ont pas ces structures, mais je pense que je vais partir du principe que mon ARN les contient, et je vais juste mettre une séquence kozak bien placée avant le rapporteur peut être, mais des gars de mon labo me disent que c'est pas la peine, car parfois ça fonctionne sans.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

Pour les constructions, oui votre explication peut être une des raisons à ma connaissance. En fait, insérer un gène rapporteur à la place du gène permettra d'étudier surtout son mode d'expression. qu'est ce qui active sa transcription et / ou sa traduction, qu'est ce qui la régule etc.  [...] On peut faire un knock in pour étudier les hétérozygotes si il n'y a pas de problème d'haploinsuffisance. Le plus fréquent est quand même de faire de la transégènese classique, avec promoteur et rapporteur qui s'inserent dieu seul sait où dans le génome.  [...]

[Biologie Cellulaire] Système Gal4 UAS

alors c'est la première fois que j'écris sur ce forum et vu qu'apparemment y'a souvent des réponses pertinentes je voulais savoir si quelqu'un pourrait m'expliquer svp le principe du système GAL4 UAS chez la drosophile (on a utilisé ce système dans un cours qui parle de vieillissement et ils ont voulu tester l'importance de l'enzyme SOD), je voudrai donc savoir quel était l'intérêt de ce système et comment ça fonctionne et autre chose que veut dire ACTC5 que je trouve constamment a chaque fois qu'ils utilisent le système GAL4 UAS.   [...] en gros, cela permet d'exprimer un gène rapporteur (dont on peut visualiser/quantifier/suivre l'expression. une protéine fluorescente, par exemple) quand le gène d'intérêt s'exprime. On peut donc savoir où et quand il s'exprime.  [...]

[Biologie Moléculaire] No hablo ingles or just a little

Le mot était. gène raporteur. Du moins c'est le seul terme que je connais et qui correspond à l'article. Peut être que gène raporteur = gène marqueur. Le gros problème c'est que je me retrouve devant une nomenclature ou des technique de biomoléculaire que je jamais vue.   [...] En fait, un gène rapporteur est un gène qui donne un résultat visible (genre, lacZ donne un produit bleu = la béta-galactosidase. GFP, CFP et toute la clique des fluorescentes font partie de ce type de gènes).  [...]

hybridation in situ vs rapporteur

Pour étudier la localisation de l'expression d'un gène (à l'échelle cellulaire, pas subcellulaire), quel est l'intérêt de l'hybridation in situ par rapport à l'utilisation d'un rapporteur sous contrôle du promoteur de ce gène (ou l'intérêt de cette dernière technique par rapport à la 1ere).  [...] Ca depend comment est realisee la fusion, il est possible de faire une fusion traductionnelle du gene rapporteur avec la proteine d'interet afin de detecter la localisation de celle ci. Dans ce cas, il est recommande de transformer une telle construction dans un mutant pour le gene d'interet afin de voir si la proteine de fuision complemente le phenotype (un tres bon controle).  [...]

système de double hybride

Alors, dans l'ordre. Dans une levure classique, les gènes GAL4 sont normalement présent. Mais dans la levure qui est utilisé, les gènes codant pour les protéines GAL4 sont apportées par un/des plasmide(s). Le gène rapporteur est normalement déjà présent, mais il peut également être apporté.  [...] Donc, le promoteur du gène rapporteur est activé par l'interaction (ou le rapprochement) des deux protéines GAL4. Ce qui permet l'expression du gène rapporteur (et sa visualisation). Ca, c'est la cas classique. Le truc, c'est que l'on ne peut pas s'en servir en l'état.  [...]

[Génétique] Enhancer trap

Mais je ne vois pas l'utilité d'insérer un facteur de transcription dans une souche.. et un gène rapporteur dans une autre.. à part pour voir que quand on les croise il y aura expression du gène rapporteur.. je ne vois pas la finalité le but et donc Y a t il une suite.  [...] Admettons que tu veuilles insérer deux gènes, A et B. Sur le plasmide a, tu y mettras un facteur de transcription (exogène) + gène A. Sur un plasmide b, tu y mettras l'enhancer (spécifique du TF) + gène rapporteur + gène B. Ensuite, tu sauras que les colonies qui expriment le gène rapporteur ont forcément les deux plasmides intégrés.  [...]

technique du double hybride

Si il y a interaction, il y aura reconstitution du facteur de transcription actif du fait de la proximité des domaines de liaison à l'ADN et du domaine de transactivation. Du coup le gène rapporteur sera activé.  [...] Ainsi pour avoir activation du gène rapporteur il faut une mise en contact du domaine d'activation au domaine de fixation. Ceci étant réalisé si il y a intéraction entre protéine X et Y.  [...]