• Forum - Question, Tampon, Glycine, Efficace

[Immunologie] Analyse réponse humorale par ELISA

Pour la révélation, nous avons utilisé un anticorps secondaire couplé à la phophatase alcaline (AP) puis nous avons ajouté le substrat (PNPP) de cette enzyme. Jusque là tout va bien. Ce que je ne comprends pas, c'est pourquoi nous avons dilué le substrat dans du tampon diéthanolamine.  [...] je ne serais pas d'une grande aide mais le seul élément que je peux apporter à ta question c'est que le tampon diéthanolamine a remplacé le tampon glycine/NaOH car il s'est révélé plus efficace. En quoi Je ne sais pas.  [...]

[Génétique] Adn

voila le probleme. je dois preparer un tampon de transfert des proteine sur une menbrane pour un test de type western. sachant ke la formulation de ce tampn est. 25mM de tris, 192mM de glycine et 20%(V/v) de methanol. on demande comment preparer 500 ml de ce tampon ( ja i reponde a la kestion) ensuite, on demande a quoi ca sert le methanol dans ce tampon.  [...] voila le probleme. je dois preparer un tampon de transfert des proteine sur une membrane pour un test de type western. sachant que la formulation de ce tampon est. 25mM de tris, 192mM de glycine et 20%(V/v) de methanol. on demande comment preparer 500 ml de ce tampon ( j'ai deja repondu a cette question) ensuite, on demande a quoi ca sert le methanol dans ce tampon.  [...]

[Biochimie] Sds page

2. Les tampons tris SDS Glycine. pour ajuster le pH à 8.8. Faut il ajuster le pH du tris d'abord ensuite y ajouter la glycine et l'sds et revérifier le pH de nouveau Ou bien mélanger le tout et régler le pH une fois pour toute (comme j'ai fais dans mon stage quand le tampon est fini.. et tout marchait très bien).  [...] Tu peux filtrer, mais ce n'est pas nécessaire (le SDS va tuer toute les petites bêtes). Le Tris a un pouvoir tampon fort, surtout à forte concentration, mais la glycine a aussiun pouvoir tampon (plus faible, certe). Si la concentration du tampon Tris que tu utilises dans ce gel est plus faible, cela peut induire des variations de pH (mais n'a pas d'impact sur la polymérisation normalement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification d'un serum à partir d'une membrane de nitrocellulose

Donc en gros, je fais migrer un echantillon contenant la proteine toxoplasmique P30 par SDS-PAGE puis aprés transfert, saturation et incubation avec un serum (à purifier) je coupe une portion de la membrane qui correspond a la proteine d interet et j utilise un tampon d elution pour eluer les anticorps a partir de la membrane.  [...] en fait pour repondre a ta question, j utilise l'electrophorése dénaturante car ma proteine precipite en gel natif c'est une question de pHi.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Le tampon de migration est un tris 25 mM, glycine 250 mM, SDS 0,1%. Je migre à 200 V jusqu'à ce que le front de migration arrive en bas.  [...] J'ai déjà vu un problème similaire au tien avec une protéine de taille comparable. C'était lié au fait que l'extrait est très dense notamment en lipide et en conséquence, le tampon de Laemmli n'était pas assez efficace pour lyser totalement les membranes.  [...]

[Biochimie] Transfert western blot raté

..alors je le refais avec du tampon de transfert tout neuf, je fais attention au bulle en roulant bien mon sandwich avec une pipette de 10ml...et résultat quasi identique. transfert moche.  [...] Apres activation, tu as mis équilibrer ta membrane dans le tampon de transfert (Les tampons de transfert doivent être à 4°C).  [...]

Problème de migration SDS-PAGE

L'expérience consiste, dans un premier temps, à dénaturer les protéines dans de l'urée 8M + DTT 5mM, puis à les renaturer par l'utilisation d'un tampon (TrisHcl, NaCl et EDTA), une centrifugation est ensuite réalisée, le surnageant correpondant à ma fraction soluble est concentrée par evaporation et mon culot correspondant à ma fraction agrégée est resuspendu dans un peu de tampon de dénaturation (Urée 8M + DTT 5mM) et Laemmli Buffer 5X.  [...] il semble que j'ai résolu le problème qui n'était autre que l'urée... En effet je dénature avec de l'Urée 8M puis renature avec un tampon (TrisHCL, NaCL, EDTA) puis je concentre ma protéine par evaporation, l'urée reste donc à trés forte concentration à la fin de l'évaporation.  [...]

[Biochimie] Pb échantillon gel Tris-Tricine

Je travaille sur un peptide inférieur à 3 KDa et je voulais le visualiser en western blot. Mais je rencontre un petit problème. lors de la migration en gel tris-tricine, mes échantillons se reserrent )( dans mon gel de séparation. Pb de sels Mes échantillons sont préparés avec des cellules fraîches et broyées directement dans le tampon d'échantillon.  [...] On a utilisé un gel Tricine à 16,5% pour les peptides entre 1,5 et 25KDa. Le tampon d'échantillon est spécifique de ce type de gel (0,1M Tris-HCl, 2% ßMEE,20% glycérol, SDS 1%, 0,02% coomassie G250)ce n'est pas du laemmli (pour gel tris-glycine)mais oui on sonique directement dans le tampon.  [...]

Voies naturelles pour sevrage de benzodiazépines

Je ne comprends pas cette affirmation. Un laboratoire ou un groupe(qui en rachète d'autres) peut vendre des médicaments et des produits phytothérapeutiques, l'un n'empêche pas l'autre. La seule chose qui compte est de trouver le médicament le plus sécuritaire ET le plus efficace pour traiter votre anxiété.  [...] Ce que j'ai trouvé efficace par contre, c'est un cocktail glycine + zinc magnésium pidolate + yerba maté. En plus ça me fait faire beaucoup de rêves.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse : volts, ampères ou watts?

Concrètement qu'en est-il Pour une électrophorèse que dois-je regarder comme valeur Car d'un tampon de migration à l'autre, la conductivité change et un même nombre de volt donnera un nombre d'ampère fort différent.  [...] Il s'agissait d'un transfer gel SDSpage sur membrane pour un Western Blot. J'ai été obligé de modifier le tampon de base et rajouter plus de glycine. Donc la conductivité a pas mal augmenté.  [...]