• Forum - Question, Tampon, Enzyme

[Génétique] Pcr

je sais que le fonctionnement de la taq polymerase nécessite la présence de ces tampon, si j'ai posé cette question c'est parce que ma chargé de TD a l'habitude de nous dire pourquoi on utilise ces tampon et elle ne se contente pas d'une telle réponse alors je croyais que vous pouviez me donner une explication plus approfondie et ceci nécessité pas une telle agressivité en disant franchement ce genre de question.  [...] Vous demandez à quoi sert le tampon, je vous réponds de manière aussi brutale qu'est posée votre question que c'est le tampon de l'enzyme. Et le mieux c'est que c'est la réponse à votre question.  [...]

[Biologie Moléculaire] électrophorèse en champ pulsé

est ce que j'ai un problème au niveau de la préparation de plug ( pas d'ADN ) ou bien problème au niveau de l'enzyme que j'ai utilisé.  [...] je ne sais pas est ce que c'est probléme d'enzyme condition d'incubation ou pas bien mélanger ou il n y a pas d'ADN déjà (plugs mal préparé) vraiment j'ai peur que ca soit question d'ADN a votre avis la fluorescance qui est dans les puits ca correspond a quoi et pkoi a votre avis il n y a pas de migration.  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

*Le tampon, c'est pour le bon fonctionnement de l'enzyme. il lui faut un pH particulier qui ne doit pas évoluer au court de la réaction. Or, les dNTP et l'ADN n'ont certainement pas les mêmes propriétés acidobasiques. d'où l'utilisation du tampon.  [...] je vais trancher. pour le MgCl2, c'est un cation divalent nécessaire à l'activité de nombreuses enzymes dont la Taq, mais il peut aussi jouer en tant que sel dans la température d'hybridation. Pour le DMSO c'est en effet pour éviter les structures II dans l'ADN.  [...]

[enzymologie] Activité enzymatique et flux

Pour cela on va chauffer l'enzyme en la mélangeant à une résine qui se liquéfie à une température de 40-42°, on applique le mélange dans une burette chaude et on fait goutter la burette dans le tampon initial de l'enzyme (Tris par exemple) à tempréature ambiante ou même plus froid.  [...] Ensuite, on va pouvoir déposer cette résine dans une colonne dont la sortie est protégée par un tampon (coton fritté, des trucs comme ça...), que l'on va équilibrer avec le tampon de l'enzyme (Tris en gardant le même exemple).  [...]

[Biologie Moléculaire] les enzymes de restrictions ...

salut a tts le mondes j'ai une question concernant les enzymes de restrictions de type III et I.  [...] Je n'ai pas vraiment compris ta question mais la différence entre ces enzymes est la température et le tampon dans lequel elles agissent. Après je ne sais pas trop si ça répond à ce que tu as demandé.  [...]

[Biochimie] Protocole détaillé préparation d'une solution stock d' EDTA

Autre question, à quoi correspond la concentration d'un tampon (1x, 10x, 50x...) et comment calculer les masses des différents produits pour préparer une solution stock de tampon (par exemple un tampon TBEx5).  [...] Donc pour cette histoire de solubilité, cela veut dire que je peux faire le mélange directement dans un bêcher au départ, puisque l'agitation ne sert à rien tant que le pH n'est pas équilibré.   [...]

[Microbiologie] digestion de plasmide

H buffer est le buffer pour l'enzyme promega. Pour la même enzyme chez NEB ce sera n'importe quel tampon (NEB1 à 4). Chez fermentas, c'est le orange buffer. Chez Roche se sera le buffer A... Il va sans dire que tous ces buffers sont différents. La bonne pratique recommande d'utiliser le buffer correspondant à l'enzyme du fournisseur.  [...] Pas faux piwi. Maintenant comme tu l'as dit, le buffer est spécifique de firme alors je sais pas si c'est une meilleure idée de le faire soi-même. En pratique, l'enzyme est normalement la même, donc le tampon devrait l'être aussi. Je crois qu'il est possible de trouver un tableau de comparaison entre les buffers des différentes firmes (sur biolabs je crois).  [...]

[Immunologie] Analyse réponse humorale par ELISA

Pour la révélation, nous avons utilisé un anticorps secondaire couplé à la phophatase alcaline (AP) puis nous avons ajouté le substrat (PNPP) de cette enzyme. Jusque là tout va bien. Ce que je ne comprends pas, c'est pourquoi nous avons dilué le substrat dans du tampon diéthanolamine.  [...] je ne serais pas d'une grande aide mais le seul élément que je peux apporter à ta question c'est que le tampon diéthanolamine a remplacé le tampon glycine/NaOH car il s'est révélé plus efficace. En quoi Je ne sais pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Des PCR qui n'ont rien à voir ont été faites pour tester l'enzyme (Phusion), le tampon de l'enzyme, l'eau et les dNTP, tout a très bien fonctionné.  [...] les amorces ont été changées et sa n'a rien donner sinon en ce qui concerne de MgCl2, nous en mettons pas, les PCR avaient toujours fonctionner sans, et mon maitre de stage m'a dit que c'était pas la peine d'essayer avec, donc je suis un peu coincer sur cette question.  [...]

[Biochimie] Protéine hydrophile ou hydrophobe ?

Je me demande même si une chromatographie n'est pas envisageable. Sinon, teste si ton enzyme se solubilise dans un tampon polaire (phosphate,...) ou dans un tampon hydrophobe.  [...] La S-Adenosylmethionine décarboxylase est une enzyme qui intervient dans la biosynthèse des polyamines. l'AdoMet décarboxylase de Archaea Methanococcus jannaschii est un prototype d'une nouvelle classe d'enzymes qui diffèrent aussi bien des enzymes eucaryotes que des enzymes microbiennes de par ses caractéristiques d'activation et de son insensibilité aux métaux tels que le magnésium.  [...]