• Forum - Quantité, Protéines, Extrait

[Biochimie] explication concernant méthode de lowry

9 tubes dont 3 concentrations sont manquantes) sachant que nous avons déjà les volumes de l'extrait enzymatique pour ces 3 derniers tubes dilué 5 fois, j'arrive au point ou il nous demande de déterminer la quantité moyenne de protéines /ml d'extrait enzymatique.  [...] dilué et non dilué tout en déterminant la quantité totale des protéines dans la fraction soluble. ya t'il une formule exacte de calcul ou bien un démarche illustré a suivre Merci d'avance.  [...]

[biochimie] activité spécifique d'un enzyme selon la concentration

On rapporte l'activité d'une enzyme spécifique sur une quantité d'enzymes totale. Ca veut dire que tu as d'autres protéines dans ton échantillon qui ne participent pas à l'activité dont tu mesures car elles ont une autre action, agissent sur un autre substrat etc..).  [...] Tu as raison. l'activité spécifique étant une activité exprimée par mg de protéines généralement. donc pour un même extrait enzymatique, l'expression de l'activité spécifique ne changera pas puisque l'activité augmente de manière proportionnelle à la quantité d'enzyme et que c'est un rapport.  [...]

[Biochimie] Rendement et facteur de purification

si tu veux, l'activité spécifique désignant la quantité d'enzyme quil faut pour une activité totale tant, en la purifiant, tu enleves les résidus pesant dans la protéine, donc je suppose que en purifiant, tu as augmenté son activité spécifique, donc le facteur de purification désigne le gain que tu as eu en efficacité.  [...] Normalement, il y a notre protéine d'intéret A + pleins d'autres protéines dans l'extrait initial. On a donc une activité totale x dans cet extrait qui est proportionnelle à la quantité de A dans l'extrait.  [...]

[Biochimie] Extraction d'enzymes musculaires

Ma question est la suivante. J'effectue un dosage protéique de mon extrait musculaire (après l'avoir broyé dans du tampon), un dosage Bradford. Est-ce que quelqu'un connait la quantité de protéines qu'on peut récupérer' en broyant un morceau de muscle de 100 mg par exemple Moi j'obtiens une très faible quantité (enfin, je pense) =.  [...] Le mieux reste que tu testes ton activité enzymatique dans les extraits que tu as. S'il n'y a rien de détectable avec 2 µg/µl de protéines, c'est à partir de là qu'il faudra penser à mettre au point la manip.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN pour puce

j'essaye d'extraire des ARN bactériens à partir d'un nombre restreint de cellules dans une solution qui contient pas mal de proteines. déjà c'est pas très simple d'avoir une quantité suffisante pour puce (10µg), et en plus je viens de les vérifier sur une puce agilent et je me rend compte que la plupart de mes arn extrait sont des 5s.  [...] donc je vais essayé une extraction en congelant mes culots (sans rien) se qui me fait un peu peur, j'ai deja essayé le RNA latter, mais ca m'a bien compliqué les choses parceque il precipite les proteines.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction protéique pour western blot

Même si mon protocole est peut être trop long, il est néanmoins complet, et peut être fait en une 1/2 journée. Au moins, il pourra comprendre toutes les étapes, savoir ce qu'il y a dans le tampon, savoir combien il mets de protéines pour son gel... Bien sûr que c'est pas primordial pour juste vérifier si ta prot est bien là dans ton extrait, mais bon, j'imagine que si sa manip marche, il va devoir en faire d'autres, avec peut-être plusieurs boites, donc il faudra mettre une quantité équivalente pour chaque puits.  [...] Je disais juste ça parce que je me doute que la première fois que tu as fais une extraction prot à partir d'une boite, si tu n'avais pas dosé, tu allais mettre au pif une quantité de protéines. Avec un risque de charger trop (ou pas assez) ton puits.  [...]

[Immunologie] Test ELISA direct

Pour un TP d'immuno, nous devons doser la quantité de protéines virales dans un extrait de vigne. Une gamme de concentration a été réalisée ainsi que les mesures d'absorbance... Nous utilisons deux méthodes, le test ELISA simple sandwich et le test ELISA direct.  [...] Ensuite je crois qu'1 simple produit en croix Concentration réference x fac dilution extrait à tester / fac dilution réference te donneras la conc initiale.  [...]

[Biotechnologie] Cellulase, comment l'extraire rapidement ?

Mais me si tu extrait tes protéines tu auras un mix de toutes tes protéines, et tu ne peux pas faire de purification home-made car il te faudrait soit des colonnes de séparation, soit des anticorps dirigés contre ta protéine et couplé a des billes magnétiques.  [...] Cependant si tu n'as pas besoin de quelque chose de pur, tu peux toujours utiliser l'extrait protéique et simplement le concentrer et tu auras l'activité cellulase dans ton extrait (mais avec d'autres protéines dedans donc d'autres enzymes et d'autres activités aussi, mais si c'est pour digérer des déchets végétaux et obtenir des dérivés glucidique, ca ne devrait pas déranger) par contre tu auras de petites quantités, si tu veux valoriser les déchets végétaux a l'échelle industrielle cela va te poser quelques problèmes.  [...]

[biologie moléculaire] Info sur le slot blot

Est-ce que grace à l'electrophorèse du western blot on peut avoir une idée de la taille et de la quantité de protéine recherchée.  [...] cette methode permet de comparer l'expression d'une protéine d'un puit à l'autre d'un point de vue qualitatif mais ne donne aucune info concernant la quantité de protéine présent dans l'extrait.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

Ton protocol m'abeaucoup aidé. J'ai extrait mes proteines et fais mon dosage de Bradford. Par contre, jai un soucis, mes proteines sont très concentrées. Du coup, pour avoir les 20µg qu'il faut pour le gel, j'ai des valeurs negatives. Que faire dans ces conditions Estce que je peux diluer mes ech Et si oui, comment pourrais-je les quantifier a la fin.  [...] Encore une. Que se passe t-il lorsqu'on load des concentrations élevées de protéines Est-ce que. la migration, le transfert et la révelation se font quand même Ou bien la concentration de protéine est-elle très importante dans les puits.  [...]