• Forum - Quantité, ADN, Taux, Protéine, Cellules

[Biologie Cellulaire] Rapport quantité ADN/expression protéique Transfection transitoire

Est ce qu'il y a un rapport entre la quantité d'ADN que l'on transfecte et le taux de protéine exprimé au sein des cellules.  [...] En fait je souhaiterais avoir une expression plus faible de ma protéine d'intérêt (et pas forcement plus de cellules transfectées...).  [...]

Pureté de l'ADN / efficacité d'expression

Certains d'entre vous ont ils déjà constaté que la pureté de l'ADN au départ pouvait affecter la capacité des cellules, ensuite, à exprimer *correctement* les protéines Je ne parle pas ici de taux de transfection, qui est bon, ce que m'indique la GFP co-transfectée par exemple.  [...] pour ce qui est de la pureté de ton ADN pour les transfections, si tu tourne autour de 1,6-1,7 c'est vraiment bien. Pour être honnête, moi j'avais une prép de plasmide qui tournait plutôt autour des 1,4-1,5 et mes transfections sur cellules marchaient très bien, y compris le taux d'expression de la protéine qui convenait pour mon type de manip.  [...]

[Biologie Moléculaire] Différence PCR semi quantitative et quantitative?

Dans les cas de PCR semi-quantitative ou de PCR compétitive, il s'agit de mesurer des quantités relatives grâce à des standards qui correspondent à des ARN ou plus rarement à des ADN. Et si je me souviens bien dans ce cas les standards subissent diverse dilution.  [...] Ainsi tout dépend des incertitudes que nécessite ta manipulation, si tu as besoin d'un résultat très précis et pointu il vaut mieux utiliser la PCR quantitative.  [...]

Antigène

Les protéines recombinantes ne sont donc pas extraite de la nature mais synthétisées en laboratoire. Pour te donner un exemple que j'ai expérimenté, moi en thèse je travaillais sur la protéine d'un parasite très pénible à cultiver. J'aurais jamais pu cultiver assez de parasites pour ensuite faire 50 étapes d'extraction/purification pour arriver à un excellent taux en ma protéine d'intérêt dans mon échantillon, et en quantités acceptables pour mes manips.  [...] Du coup, j'ai fait exprimer ma protéine d'intérêt à une bactérie (E. coli). elle se cultive très facilement et je peux lui faire produire ma protéine en très grande quantité. C'est ce qu'on appelle le clonage moléculaire. Grâce à la transgenèse. Après expression de la protéine, je dois la purifier pour me débarrasser de tout ce qui appartient à la bactérie et me retrouver avec un taux idéalement avoisinant 100% de ma protéine d'intérêt.  [...]

[Evolution] Méthode de datation des ancêtres commun

il y a pas mal de discussions pour savoir si l'horloge moléculaire est relative au temps calendaire ou au nombre de générations (d'organismes ou de cellules). Par exemple on sait qu'il y a chez l'Homme beaucoup plus de divisions cellulaires entre le zygote et le spermatozoïde qu'entre le zygote et l'ovule, ce qui donne en théorie plus de chances à des mutations d'appraître chez les hommes que chez les femmes, et donc l'horloge moléculaire ne serait pas la même le long de la lignée mâle que le long de la lignée femelle (mais les deux lignées se croisent continuellement bien sûr).  [...] Compte tenu de la quantité d'information génétique dans l'ADN, ce que l'on considère comme une mutation, est une mutation qui est globalement conservée au sein de l'espèce à partir du croisement de différents génome. Le taux de mutations dans l'ADN est lié à la fiabilité de sa réplication.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transduction/transfection

Tu peux faire une lignée stable avec la lipofectamine, c'est juste que le taux de cellules transfectée est faible, et le taux de cellules ayant intégré l'ADN encore plus faible... D'où le moins rapide/moins efficace. Car avec un vecteur viral, tu auras beaucoup plus de cellules transduites et si c'est un vecteur intégratif, tes cellules qui auront été transduites vont intégrer efficacement cet ADN, ce qui n'est pas le cas avec la lipofectamine qui ne pemret pas d'intégrer l'ADN.  [...] Cependant sur le manuel de Promega il est dit que ce plasmide peut exprimé la protéine d'interet (que l'on aura eu soin d'intégrer) de manière transitoire ou permanente... Si c'est la séquence du plasmide qui permet ou pas son intégration dans l'ADN de la cellule, comment obtenir ces 2 sortes d'expression (transitoire/permanent) Quel facteur supplémentaire entre en jeu.  [...]

Y a-t-il toujours récidive ?

Ce n'est pas juste une probabilité. Il faut tenir compte du temps. Généralement dans les articles d'épidémiologie on trouve des risques relatifs de récidive (ou de décès) qui permettent de comparer deux populations (par exemple celle qui a reçu tel traitement versus celle qui a reçu tel autre traitement) et qui proviennent de modèles statistiques temporels (modèle de Cox pour les intimes).   [...] La plupart des médicaments utilisés en chimiothérapie s'attaquent à l'ADN pour bloquer les mitoses et détruire les cellules qui ont un taux de mitose élevé. Dès qu'on cible l'ADN il y a un risque de provoquer des mutations dont certaines peuvent entraîner plus tard l'apparition d'un autre cancer sans rapport avec le premier.  [...]

Micro adénome et hyperprolactinémie

Au jour d'aujourd'hui je ne sais pas comment vont se passer les choses. J'aimerai des conseils de personnes qui sont dans le même cas..Biensûr ensuite en symptômes qui peuvent être dû à cet adénome et la prolactine trop élevée, se sont des maux de têtes très fréquents qui finissent en migraine et depuis peu (2 fois) en migraine ophtalmique avec vomissement.   [...] Il s'agit en fait d'une tumeur. et qui dit tumeur, dit cellules-rebelles. celles-ci n'en font donc qu'à leur tête, et produisent constamment de la PRL en trop grande quantité, sans prendre la peine de vérifier le taux sanguin.  [...]

[Biochimie] Dosage proteine totale sur FHN

J'evalue l'activité de certaine molécules sur deux type de cellules, les FHN et les HaCAT. Pour evaluer cette activité je fais un dosage BCA sur les culots cellulaire pour determiner le taux de proteine totale.  [...] Sur les Hacat la coloration se réalise au maximum en 20mn alors que sur les FHN la coloration se fait en minimum en 2h30mn. Tout d'abord j'aurais voulu savoir si pour certain d'entre vous le constat etait le même. Ensuite j'aurai voulu savoir si ajouter une faible dose de soude pour eclater les membranes et donc acceler la coloration etait une bonne solution.   [...]

mesure de l'expression d'un gene

gloups en effet j'ai tapé un peu vite, pour Run ON et PCR quantitative c'est pour l'ARNm et pas la proteine sorry mais ce que je voulai dire c'est que oui la PCR est plus fine mais c'est une mesure de la quantité globale d'ARN aussi fine soit elle. Le RunON dose l'ARN transcrit pendant un temps t, et comme je veux connaitre mon taux de transcription, c'est plus adapté non.  [...] Enfin pour le marquage métabolique, je ne supprime pas le biais de la stabilité de la proteine c'est vrai, mais je ne mesure plus que les proteine traduites pendant un temps donné et non pas la quantité totale dans la cellule. Si j'inactive le protéasome je peux optimiser ma mesure c'est cool ça.  [...]