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[Biologie Moléculaire] distribution de la taille de fragment d'ADN pour un échantillon de petite quantité

[Biologie Moléculaire] distribution de la taille de fragment d'ADN pour un échantillon de petite quantité.  [...] distribution de la taille de fragment d'ADN pour un échantillon de petite quantité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quantité d'ADN

Je dispose d'un échantillon contenant un extrait d'ADN. Cet échantillon a été dilué au 1/100. Je mesure la DO à 260 nm pour calculer la quantité d'ADN contenue dans l'échantillon.  [...] Oui mais pas au niveau de l'absorbance hein. D'abord tu fais ton calcul (ou ton report de valeur sur ta droite étalon) et ensuite tu prend en compte le facteur de dilution.   [...]

PCR et RT-PCR

Pour donner un exemple, si on veut amplifier des ARNm, on peut utiliser une amorce poly-T qui va venir s'hybrider sur la queue poly-A des ARNm. L'enzyme RT va ensuite allonger cette amorce et synthétiser l'ADNc (attention, il me semble qu'on parle d'ADNc uniquement quand il s'agit d'ADN obtenu par transcription inverse).  [...] Dans la PCR quantitative, on va quantifier la quantité d'ADN présent dans un échantillon X en comparant l'intensité de la fluorescence émise par l'échantillon pendant l'amplification aux intensités d'une gamme d'ADN dont on connaît les quantités, amplifiés en parallèle.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

La PCR en temps réel est une PCR où on suit l'amplification d'ADN en temps réel, point. Le fait de déterminer la quantité intiale n'est qu'un bonus, une possibilité qu'elle offre mais qui n'est pas obligatoire.  [...] Si on passe une gamme d'ADN, ie une série de puits dont on connait la quantité d'ADN mise dans chacun, on pourra établir une droite reliant la quantité d'ADN et le Ct (principe d'amplification de la PCR, cf wikipedia si des doutes là dessus). Ainsi en connaissant le Ct d'un échantillon, on pourra estimer la quantité d'ADN initiale. Et ça c'est une qPCR en Temps Réel.  [...]

[Biochimie] Calcul d'une concentration en ADN

Que souhaitez vous faire exactement Trouver la masse d'ADN pr ésent dans l'échantillon initialement Trouver la quantité d'un plasmide pr ésent initialement dans la solution.  [...] Pour la quantité de plasmide, vous avez la taille du plasmide. A partir de là, toujours en utilisant la masse molaire moyenne d'un dNTP et en vous rappelant que l'ADN est double brin, vous retrouvez la masse molaire du plasmide. Comme vous connaissez déjà la masse de plasmide dans l'échantillon, vous retrouvez le nombre de moles (la quantité) de plasmides dans l'échantillon.  [...]

calcul d'une quantité d'ADN- PCR

Dans un échantillon de 1 microg d'ADN, on a 1pg de fragment à amplifier. Quelle quantité d'ADN amplifié obtiendra-t-on après 30 cycles de PCR, en admettant un rendement de 10puisssance 6.  [...] Le doublement de la quantité d'ADN à chaque cycle est une utopie qui n'a lieu que si l'efficacité de la réaction est optimale (100%). D'où les chiffres énormes que tu obtiens HigginsVincent. Si telle était le cas, nous nous contenterions d'une dizaine de cycles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Interprétation PCRq en temps réel (SYBER Green)

A partir du moment ou la spécificité de ton amplification d'ADN champignon est avéré, il me semble que tu peux en conclure que ton échantillon est positif pour ce champignon. même en faible quantité, ce dernier est présent et se multiplira de toute façon.  [...] D'une part, avec la quantité d'ADN du champignon, tu calcule le nombre de génome de champignon que tu as dans ton échantillon (masse d'ADN contaminant/masse du génome du champignon). Tu obtiens n1.  [...]

dNTP dUTP et UNG

en fait le concept de l'UTP (si je me souviens bien), c'est qu'on fait nos PCR avec de l'uracile à la place. Ca ne change rien à la réaction, ni à la quantification.  [...] le concept du truc, c'est que le produit de PCR ne puisse pas servir de matrice dans une autre PCR, assurant que ce qu'on détecte, c'est bien l'ADN de l'échantillon, et pas une contamination par une autre réaction (parce qu'au bout d'une PCR, on a des kilos d'ADN, c'est donc très facile de faire des faux positifs quand le contaminant éventuel est en quantité écrasante par rapport à l'ADN échantillon).  [...]

[Immunologie] Diagnostic_PCR

À partir d'un échantillon complexe et peu abondant (par exemple une goutte de sang), cette technique permet d'obtenir rapidement une quantité importante et exploitable d'un segment pr écis d'ADN (par exemple un segment d'ADN modifié dans une maladie...).  [...] Cette technique est également utilisé pour amplifier un segment pr écis d'ADN d'une bactérie(ou parasite,…) pour étudié le degré de virulence par exemple.  [...]

Housekeeping gene (gene de ménage)

Oui mais est ce que justement on pourrait faire une normalisation, en se disant qu'une certaine quantité d'ADN génomoque correspondrait à une quantité de cellules donnée dans chaque échantillon.  [...] Ce que j'ai envie de faire c'est de d'amplifier un gène de ménage (spécifique à l'Homme) dans un volume d'échantillon de sang donné puis amplifier le même gène dans le même volume d'échantillon de selle, puis faire une normalisation par dilution des quantités d'ADN. Qu'en pensez vous.  [...]