• Forum - Protocoles, Saturation, Membrane

[Biochimie] tween20 et western-blot

Je voulais savoir à quoi sert exactement le tween20 dans le western Je sais que c'est un detergent donc je vois bien l'utilité pendant les phases de lavage pour minimiser les interactions non spécifiques mais en fonction des protocoles il y en a aussi en général dans la phase de saturation de la membrane (avec la BSA ou la caséine).  [...] .. quelle est alors son utilité Que recommanderiez-vous faut-il en mettre pendant la saturation et si oui pourquoi.  [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Ce que je ferais pour cerner un peu mieux le problème, c'est un dot-blot. tu déposes directement sur une membrane de WB 10 µl de ton échantillon, tu attends deux minutes que ça sèche puis tu traites la membrane comme si c'était un WB en reprenant le protocole à l'étape de saturation de la membrane.  [...] C'est ce qu'on veut d'ailleurs montrer en traitant les cellules différemment). J'ai alors acheté des gels commerciaux de chez BioRad ( 10%). J'ai suivi leur protocole de migration (200V pendant 45 min), j'ai fais le semi dry transfert à 25V pendant 2h. Le transfert a été parfait car mon marqueur de poids moléculaire de 300kda a été bien transféré.  [...]

[Biochimie] Western blot

Quelqu'un peut-il me donner exactement un protocole pour preparer un gel de 8%. Moi le SDS je le met au moment de la préparation de mon gel,d'autres personnes le met dans les tampon de séparation et de concentration.  [...] Tampon de saturation. attention, ne JAMAIS utiliser de lait pour saturer des membranes qui seront incubées avec des anticorps anti-phosphotyrosine. Le lait contient des phosphatases, alors tu vas perdre ton signal. Sinon, comme le dit Yoyo, il n'y a pas de protocole idéal.  [...]

[Biologie Moléculaire] Petite molécule hydrophile

Edit. en relisant mon message je comprends que la confusion soit possible vu qu'apparemment l'auteur demande si cette diffusion est possible hors contexte d'une membrane plasmique qui possède les protéines assurant ces rôles.  [...] Donc j'avais tords et et il n'y a aucune molécule hydrophile qui peuvent passer par perméabilité membranaire sélective. Cependant, L'O2 et le CO2, hydrophobe, peuvent passer à travers la membrane plasmique selon la perméabilité de la membrane, c'est-à-dire selon la saturation des queues phospolipides.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification d'un serum à partir d'une membrane de nitrocellulose

Donc en gros, je fais migrer un echantillon contenant la proteine toxoplasmique P30 par SDS-PAGE puis aprés transfert, saturation et incubation avec un serum (à purifier) je coupe une portion de la membrane qui correspond a la proteine d interet et j utilise un tampon d elution pour eluer les anticorps a partir de la membrane.  [...] jai verier les perides d incubation et jusque la j ai pas eu vraiment une bonne elution les anticorps restent plutot fixé sur la membrane.  [...]

[Biologie Cellulaire] Pourquoi perméabiliser une cellule

Pour faciliter l'entrée de la molécule Pour faciliter l'analyse Pour comparer l'action de la molécule avec et sans membrane cellulaire.  [...] Salut, je te réponds plutôt tard, mais pour les personnes qui se posent la même question que toi, je pense qu'ils font ce test (de perméabilisation de la membrane) au cas où il y aurait saturation d'un transporteur éventuel (tt dépend des caractéristiques de la molécule) mais apparemment ce n'est pas le cas puisqu'il y a un meilleur fonctionnement avec la membrane.  [...]

[Biologie Moléculaire] Sperme de saumon

En biologie moléculaire, il est très courant d'utiliser le sperme de saumon dans les techniques d'hybridation des acides nucléiques pour saturer les membranes. Je me demande comment et quel est le principe de cette saturation Est-ce de l'ADN pur qui est dans le sperme qui sert à s'hybrider aux sites vides de la membrane.  [...] Saturer les sites libres de la membrane empechent donc la fixation aspécifique de la sonde, et donc un bruit de fond trop important.  [...]

[Biologie Moléculaire] Au secours : Western en danger

Voila, j'ai un gros soucis mon labo ferme le WE et j'ai mis la solution de saturation qui s'avère etre du lait a 5% dans du TBS-T... Je ne peux pas le laisser tout le WE... Est-ce que si je seche la membrane je vais abimer les bandes Est ce que je dois laver, laisser dans du tampon tout le WE.  [...] Ça ne craint rien si il n'y a pas de risque d'évaporation et si vous êtes à 4°C.   [...]

Saturation oxymétrie...

Il parraît que notre sang (ou plutôt l'hémoglobine) dissout l'oxygène (jusque là, je suis d'accord, quand je retiens ma respiration, l'expérience me prouve que je manque d'oxygène...) et que l'on peut mesurer la saturation en oxygène de l'hémoglobine. Mais c'est quoi cette saturation Je me dis que c'est le rapport entre la concentration maximale d'oxygène dans le sang et la concentration réelle, puisque c'est un pourcentage.  [...] Il semble que l'ampoule de sérum coûte 40 à 60 €, et, selon le nombre de Dl50 injectées et l'espèce incriminée, il faudra un nombre pouvant monter facilement jusqu'à 10 ampoules pour traiter l'envenimation. Dans ce cas, en l'absence de la possibilité de traitement sérothérapique adapté (demandant aussi l'identification de l'espèce), une prise en charge respiratoire rapide en régulant la saturation d'oxygène dans le sang en variant le rythme d'une ventilation artificielle ne peut-elle pas être d'une éfficité plus accessible que le sérum Il semble que la mesure de l'oxymétrie soit simplement une mesure d'absorption de la longueur d'onde qui va bien à travers un doigt par exemple.  [...]

[Microbiologie] Résistance des bactéries à l'acidité

Tu as aussi la composition de l'adn, chez les bactéries extremophiles, souvent l'ADN possède un fort pourcentage en GC empêchant ainsi la dénaturation de l'adn au sein de l'organisme.   [...] Au niveau lipidique, le degrés de saturation varie et les liaisons ester sont remplacées par des liaisons éther plus résistantes à la chaleur. Parfois les membranes deviennent une monocouche lipidique possédant deux extrémités hydrophiles.  [...]