• Forum - Protéine, Rôle, Témoin

[Biologie Moléculaire] Interprétation de figures : Protéine p53

On en conclut que cette expérience de GST démontre que p53 interagit avec la protéine Chk2 en condition de stress. En revanche, p53 n'interagit pas avec le GST seul.  [...] Pour cela, on a utilisé des cellules d'ostéosarcome que l'on a irradié dans le temps, et on a analysé l'expression de p53 et la phosphorylation sur la sérine 20.   [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

oui c'est une protéine nucléaire mais je ne crois pas qu'elle ne puisse pas etre récupérée da,s le lysat alors que le témoin positif montre sa présence.  [...] je m'attends donc à avoir une augmentation d'expression de ma protéine dans les échantillons traités et dans le témoin 20% SVF et rien dans témoin négatif.  [...]

western-blot

Je fais également des western blot et j'ai le même problème que toi. je resuspend mes protéines directement dans le tampon de charge donc je ne peux pas quantifier la quantité de protéines que je dépose sur gel.  [...] L'autre solution est d'hybrider ta membrane avec un second anticorps. qui va reconnaitre une protéine témoin (style l'actine si bien sur la taille de ta protéine témoin n'est pas la même que celle de ta protéine d'intérêt).  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

Les bandes d'actine ont un rôle de témoin. Par exemple, pour pouvoir comparer les deux conditions dans le gel A il faut que les deux bandes d'actine est la même intensité (ce qui veut dire que les quantités de protéines sont a peu près égales entre les deux conditions).  [...] actin. c'est le témoin de charge qui permet d'estimer l'intensité de chaque bande et d'évaluer le niveau d'expression de chaque proteine.  [...]

[Biologie Moléculaire] structure des protéines

En revanche, je vois que tu n'as pas répondu à une question importante. qu'est-ce que le témoin Et quel est le rôle des marqueurs insuline et pro-insuline dans cet exercice.  [...] Le témoin sert de comparatif par rapport à l'objet qu'on étudie, il ne subit aucune modification. Le rôle des marqueurs est de comparer leur place sur le gel par rapport à celle des polypeptides immunoprécipités.  [...]

[Biochimie] Ratio de Western Blot

En western blot, après quantification, on ne peut comparer deux bandes entre elles que s'il s'agit de la même protéine, révélée par le même anticorps primaire et secondaire et que la quantification est normalisée par le témoin de dépôt.  [...] Pour ton exercice, tu ne précises pas si les bandes comparées concernent la même protéine donc difficile de te répondre. Est-ce que le témoin E-cadherin bouge entre les deux pistes.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

un pour la protéine d'intérêt, un pour le témoin de dépôt (actine dans ton cas). Bien entendu, cela n'est pas optimal pour la normalisation par le témoin de dépôt, mais si le dépôt est bien homogène entre les deux gels et que le volume est déposé avec précision, c'est valable.  [...] Ce que je fais maintenant c'est un mix de mes 2 Ac primaire. Comme ca, les conditions sont scrupuleusements identiques entre mon controle et ma proteine d'interet. Si les tailles sont trop proches... changer de controle interne.  [...]

[Biochimie] retard sur gel

Pensez vous qu'il y a une interaction directe La nature des échantillons par exemple est très critique. protéine recombinante pure, extrait enrichi, extrait total, etc.  [...] c'est une proteine recombinante pure, et je pense que la protéine est inactive in vitro vu sa structure (HTH, doigt de zinc) lui permet normalement de se fixer sur les oligo marqués. et la seule hypothese que je peux y mettre est que ma proteine est activée par des proteine chaperonnes.  [...]

[Biochimie] pH optimal et Stabilité d'une enzyme

Ce ne sont que des propositions, d'autres techniques peuvent être employées (ionisation douce en ESI-MS, RMN, digestion ménagée,...). Le but de ces approches étant d'observer une modification de la structure de la protéine qui en soit est témoin d'une déstabilisation de la protéine.  [...] je te remercie énormément d'avoir répondu à mes questions et j'en ai d'autres. C'est que la biochimie n'est pas vraiment mon domaine et j'ai parfois des petits casse-têtes. Pour déterminer le pH optimal de mon enzyme, faut-il incuber l'enzyme et le substrat à un pH donné pendant un certain temps et effectuer le dosage.   [...]

[Biochimie] effet toxique des AINS

alors jai eu un atlier en pharmacologie,toxicité des AINs (diclofenac,volatrene) apres tout le protocol,on a extrait le sang et le fois des souris (temoin et teste) afin de mesurer lactivité enzymatique (anti oxydante ) de la catalse,deja pour quoi,quel est le rapport (entre la toxicité le sang le fois,et cette acitvité ).  [...] En faite dans les résultats,la souri atteinte d'un ulcère,à une activité enzymatique de la catalase trés faible (dosée dans le fois et moyenne dans le sang) comparé aux lot de souris temoin,l'AINS va inhiber la COX et donc la synthèse de prostaglandine,qui joue un role dans la protection des muqueuses gastrique,pour ce qui est du rapport avec les radicaux libre j'en suis pas trés convaincu.  [...]