• Forum - Protéine, Problèmes, Rendement

[Biologie Moléculaire] Purification d'un serum à partir d'une membrane de nitrocellulose

Une question me taraude. vous voulez purifier des Ac pour les utiliser dans une colonne d'affinité. Mais selon votre procédure utilisant une sélection sur SDS-PAGE ne risquez vous pas de sélectionner des anticorps qui ne reconnaitrons pas la structure 3D de votre protéine Ce qui risquerait de poser quelques problèmes quant au rendement de votre purif par affinité sur colonne.  [...] en fait pour repondre a ta question, j utilise l'electrophorése dénaturante car ma proteine precipite en gel natif c'est une question de pHi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

J'ai refais une PCR de 40 cycles sur des échantillons hétérozygotes (j'avais obtenu 2 bandes à l'époque où tout allait bien..) et je n'ai toujours qu'une bande Je ne pense pas que le problème soit le nombre de cycles dans mon cas.  [...] Perso, je suis très suspicieuse envers la protéinase K. malgré le fait qu'elle est supposée avoir un effet bénéfique dans le cadre des PCR, j'ai eu d'énormes problèmes l'an dernier avec elle. En fait, mes PCR ne donnait un rendement correct (ou du rendement tout court) qu'en absence de protéinase K... Je n'ai jamais pigé pourquoi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification Protéines Tag 6His

Ce qui arrive parfois avec le [His] 6 c'est qu'il se replie sur la protéine, du coup le rendement de fixation est moisi. Une petite dégradation de la protéine pourrait empêcher cela et augmenter l'affinité de cette version pour les billes. Ce phénomène est totalement protéine dépendant.  [...] Ce qui arrive parfois avec le [His]6 c'est qu'il se replie sur la protéine, du coup le rendement de fixation est moisi. Une petite dégradation de la protéine pourrait empêcher cela et augmenter l'affinité de cette version pour les billes.  [...]

[Biochimie] Facteur de purification et rendement

J'ai quelques problèmes pour calculer un facteur de purification et mon rendement lors de la purification par chromatographie d'affinité metallique de la béta-galactosidase taggée par une queue six histidines.  [...] pour chaque fraction d'élution. J'ai également ces valeurs pour ma fraction d'exclusion, mes deux lavages, mon extrait brut et ma fraction insoluble.   [...]

[Biochimie] Expression et purification de protéines recombinante en milieu minimum

Expression et purification de protéines recombinante en milieu minimum.  [...] Je cherche à améliorer mon rendement dans la production d'une protéine recombinante (7000 Da) dans E.Coli, et dans un milieu minimum enrichis en 13C et 15N. Conditions de cultures, Milieu...etc.  [...]

Vaccin hépatite B - Page 4

2- Optimisation du rendement. c'est en g/l la quantité de protéine fabriquée par litre de fermenteur et par cycle de fabrication (un bioréacteur de 20 000 l peut réaliser 20 cycles/an).  [...] Ces rendements sont souvent de l'ordre de 1,5 à 2 g/l. les meilleurs espoirs s'orientent vers 5 g/l. On dit souvent qu'un bioréacteur de 20 000 l produit assez de protéines pour assurer $ 400 millions de chiffre d'affaires par an, dans le cas d'un monoclonal (le prix de revient d'une telle production est de l'ordre de $ 50 à 60 millions).  [...]

[Biotechnologie] Rendement production protéine recombinante

Je cherche un ordre de grandeur du rendement de la production de protéines en système bactérien (protéines recombinantes), et plus particulièrement de l'insuline.  [...] La valeur exacte importe peu (et je me doute qu'elle varie d'une protéine à l'autre), mais j'aimerais savoir si on attend plutôt des mg/L, dizaines de mg/L, g/L, etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

j'ai eu le meme probleme il n'y a pas longtemps avec un insert de 7 kb (oui 7000 pb.). Je suis passé par un vecteur de sous clonage type TOPO TA cloning et je l'ai ressorti et cloné nickel. C'etait donc bien un probleme de digestion de mes fragments au départ (malgré les nucléotides supplémentaires rajoutés lors du design en 5').  [...] Sinon les problemes liées à l'extraction des bandes des gels sont la conséquence d'un mauvais rendement d'extraction J'utilise le kit de promega et personnellement je n'ai jamais eut de probleme, mais comme piwi j'essaye au possible de ne pas passer par la, a cause de la quantité d'ADN perdue.  [...]

[Divers] Aide sur proteine enzymatique

Tout d'abord je dois faire un schéma synthétique de la biosynthese d'une proteine enzymatique. Apres je dois présenter les facteurs susceptibles d'en modifier l'activité.  [...] Les facteurs suseptible de modifié l'activité d'une proteine enzymatique sont trés nombreux mais je pense qu'il faut que tu reflechisses au concentration de substrat present dans le milieu.  [...]

[Biochimie] séparation des proteines

pour avoir le rendement de ma reaction, j'ai fait la somme des densités optiques des éluats obtenus après la separation de ma proteine, divisé par la D.O de ma solution initial(serum albumine +bichromate).  [...] Ensuite pour doser je te conseille de prendre ta DO à 280 nm dans avec ta protéine diluée au 1/10 dans de la guanidine 6M, ensuite avec le epsilon molaire de l'albumine et la loi de beer lamber tu retrouves ta concentration le plus simplement du monde.  [...]