• Forum - Protéine, Intérêt, Dégradation

[Biologie Cellulaire] Besoin d'aide dans l'identification d'une molécule !

Ca marche plutot bien pour les protéines qui interessent beaucoup de personnes dans le monde. Mais, des lors que tu t'interesses a une protéine un peu originale, pour laquelle peu d'anticorps ont ete produits, il n'est pas rare de trouver des anticorps peu specifiques, qui vont pouvoir se lier egalement a des proteines autres que celle qui nous interesse.  [...] Cela pourrait aussi être un produit de dégradation de ta protéine d'intérêt, qui contient l'épitope ciblé par ton anticorps primaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Proteines recombinantes

Les protéines n'ayant pas intégré le plasmide vont donc crever, on ne fait rien avec. Pourquoi toutes les bactéries n'intègrent pas le plasmide Pas vraiment de réponse, ça dépend de beaucoup de choses, c'est un peu comme les transfections pour les cellules eucaryote, tu n'as jamais 100% d'intégration et tu dois valider tes transfections.  [...] L'intérêt d'avoir une protéine hybride beta-galactosidase et chaine de l'insuline est d'éviter la dégradation de l'insuline, en effet la bactérie ne connait pas ce gène car elle n'en a pas besoin donc fera tout pour le dégrader. Alors que la beta galactosidase elle le connait bien donc ta chaine d'insuline sera protégée de la dégradation.  [...]

ubiquitine et protéasome

Si tu mets un bloqueur il n'y aura pas dégradation. Si tu vois une accumulation avec ton vecteur et sans ton vecteur (toujours avec un bloqueur) c'est que ton vecteur ne joue pas de rôle dans la dégradation. Si tu veux voir l'ubiquitination de la protéine alor sil faut bloquer le protéasome, et tu peux utiliser la technique classique de purif (mais qui est pas évidente du tout et demande un paquet d emise au point).  [...] 2. Y'a t-il intéraction entre ta protéine d'intérêt et la protéine accessoire sois disant nescessaire pour la dégradation Et si oui, est ce que cette intéraction est nescessaire et suffisante pour la dégardation de ta protéine d'intérêt.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

Mais que viens faire alors ce gène LacZ je sais qu'en présence de glucose celui-ci va permettre sa dégradation en créant les protéine necessaire... mais je vois vraiment pas son interet ici.  [...] J'ai remarqué que le polylinker se situait avant le gène LacZ sur le plasmide pUC. Donc notre insert sera forcement au niveau de ce polylinker et par conséquent avant le gène lacZ... Or si j'ai bien compris on veux aussi placer l'insert à l'intérieur du gène lacZ pour l'empécher d'exprimer des protéines dégradant le lactose.  [...]

dégradation de protéine recombinante

La seule chose que je peux dire c'est que lorsque je fais un immunoblot avec un anticorps anti-histidine je n'observe que ma protéine d'intérêt mais cela n'exclue pas que la protéine ait perdu son étiquette histidine lors de sa dégradation et que les bandes observées par coloration au nitrate d'argent ne soient pas ds formes de dégradation.  [...] Ta purif de proteine doit aussi etre faite dans une souche de coli deletée de ses proteases (genre BL21). A partir de la les degradations deviennent deja moins frequentes (tjs rajouter un peu d'inhibiteur pour les contaminations exterieures).  [...]

[Biochimie] Protéines

1) Une protéine ROD 1 est peu sensible à la trypsine. Elle ne possède pas de boucles qui contiennent une lysine ou arginine. On fait agir la trypsine.Si la protéine est en interaction avec un liposome, cela génère des produits de dégradation. La trypsine coupe des sites d'actions dans la protéine.  [...] 2) La conformation d'une protéine change en présence de calcium.vous disposez d'une solution de trypsine & de l'ensemble du matériel d'un labo de biochimie. Comment mettriez vous en évidence ce changement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Turn over protéique

Pour les protéines ubiquitin like, est ce que tu sais si certaines d'entre elles ont été identifées dans des mécanismes de dégradation protéasome dependante ubiquitine indépendante... Parce que ça serait une bonne piste de réfléxion pour l'article que je dois présenter, et la seule chose que j'ai pu trouvé c'est une protéine pup chez mycobactérium, autant dire que je suis un peu loin de mon modèle eucaryotes.  [...] Et surtout, si c'était possible, parce qu'au moment de présenter notre article, quand sera venu le temps de la discussion, on va essayé d'emmettre des hypothèses sur le phénomène de dégradation protéasome dépendante, ubiquitine indépendante, et donc on se refèrera à l'article sur la pupylation, mais j'aurais aimé pouvoir encore compléter en expliquant une expérience pour mettre en évidence une protéine ubiquitine like intervenant dans la dégradation.  [...]

[Biochimie] Dégradation tag et protéase

De plus, ils surexpriment Arc via un plasmide, ca ne m'etonnerais pas qu'ils sur expressent Arc au point de saturer le systeme et donc d'avoir pas mal d'Arc soluble et dans le cytoplasme. Du coup la degradation initiale est probablement juste la degradation de la proteine soluble.  [...] Quand j'avais parle de mon probleme avec T. Baker elle m'avait dit que c'etait interessant et qu'ils n'avaient pas d'experience sur la degradation d'une strong DNA binding protein (j'avais fait, entre autre, une fusion '-ssrA ).  [...]

[Biochimie] Recherche d'une Protéine négative

Je veux dire en utilisant protéine négative, une protéine qui annule les effets d'une autre protéine, dans ce cas les effet de la préséniline.  [...] Pour les présénilines, il peut être envisagé soit d'augmenter leur dégradation par activation du protéasome (mais ce n'est pas du tout une stratégie thérapeutique permettant d'être ciblée) soit d'inhiber l'interaction entre les présénilines et le précurseur de la protéine amyloïde ².  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN interference

L'ARNi est un acide nucléique qui peut être simple ou double brin et qui va aller interférer (de là son nom) avec un ARNm donné. Pour cela l'ARNi se fixe spécifiquement à l'ARNm et conduit à sa dégradation et de fait on assiste à une diminution de la traduction de l'ARNm en protéine.  [...] Un ARN antisens, concernant les eucaryotes est généralement introduit comme cité plus haut de manière artificielle, en tout cas, les plantes et invertébrés n'ont pas intérêt à en produire, car si cela arrive, il va se lier à l'ARN messager sens présentant la séquence complémentaire et cela induira un ARN db pris en charge par Dicer 2 (invertébré) et DCL-2 et DCL-4 (plantes) qui vont alors mettre en place toute la machinerie du RNAi et alors conduire à l'extinction définitive de ce gène chez l'organisme.  [...]