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[Biochimie] Dosage proteine totale sur FHN

J'evalue l'activité de certaine molécules sur deux type de cellules, les FHN et les HaCAT. Pour evaluer cette activité je fais un dosage BCA sur les culots cellulaire pour determiner le taux de proteine totale.  [...] Sur les Hacat la coloration se réalise au maximum en 20mn alors que sur les FHN la coloration se fait en minimum en 2h30mn. Tout d'abord j'aurais voulu savoir si pour certain d'entre vous le constat etait le même. Ensuite j'aurai voulu savoir si ajouter une faible dose de soude pour eclater les membranes et donc acceler la coloration etait une bonne solution.   [...]

Besoin d'avis pour optimiser extraction d'ADN à partir de tissu FFPE en vue d'une CGH

.). Le rôle de la protéine K serait de digérer les cellules et les nucléases (merci de me confirmer ceci..cela voudrait dire que les nucléases conservent leur activité, malgré l'inclusion en paraffine Ou seulement une meilleure lyse cellulaire). Par ailleurs, une incubation à 90°C pendant une heure, après la digestion, permet non seulement d'inactiver la protéinase, mais aussi d'inverser les modifications entrainées sur les acides nucléiques par le formol (notion de cross-linkage avec les protéines, quelqu'un pourrait-il m'expliquer ).  [...] Je propose donc de réaliser le protocole de base, ainsi que celui-ci, mais en faisant varier 3 paramètres (j'ai le droit de faire 4 analyses). Tout ceci à partir d'un même échantillon bien sur. Que me conseilleriez vous de faire varier Le temps d'incubation de la protéinase, afin (dans le cas ou mon protocole fonctionnerait) de déterminer si un temps plus court peut suffir.  [...]

[Biologie Cellulaire] GTPase de la protéine G

Je crois que c'est a peu près bon tout ce que j'ai dit hors mon prof a dit après que si l'activité GTPase était courte l'activité de la protéine G était courte également. Je trouve ça contradictoire avec la première affirmation, quelqu'un pourrait il m'éclairer.  [...] Par exemple la protéine RhoA, qui est une protéine G (ce qui signifie que son job, pour faire simple, est d'hydrolyser le GTP), se balade dans la cellule, et quand elle voit un GTP, elle le casse en GDP+Pi, elle a une activité GTPase.  [...]

localisation de l'appareil de Golgi

Ces organites sont présentes dans toutes cellules nucléées. On les trouve plus particulièrement dans les cellules ayant une forte activité de production de protéines.  [...] Donc d'après ce que tu dis mon idée était juste, puisque les cellules endocrines et exocrines ont - par définition - une forte activité de production (et de secrétion) de protéines. Qu'en penses-tu.  [...]

[Biologie Cellulaire] les ribosomes

Bon, dernière intervention de ma part sur ce sujet parce que le manque d'effort flagrant de ta part, himissandmister, me fait perdre patience. si l'azote que tu mesures ici traduit une activité mitoTique (pas mitodique ) et qu'en même temps on parle de ribosomes, quelle peut être la conclusion.  [...] Or, MaliciaR vous a dit que l'activité de la synthèse protéique est plus importante dans le cas d'une activité mitotique importante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quel est le rôle du protéasome ?

Un des genes pouvant provoquer la maladie est celui de la Parkine, une proteine ayant une activite E3 ubiquitine-ligase (les E3 sont les enzymes qui lient de facon specifique l'ubiquitine a ses substrats). Lorsque ce gene est mute, un certain nombre de proteines ne sont plus degradees par le proteasome et s'accumulent dans les cellules ce qui finit par en provoquer la mort.  [...] Ben non... Il degrade aussi des ARNs cellulaires et viraux. Ces activites endonucleasiques sont visiblement portees par les sous-unites alpha du proteasome (ce sont celles qui forment les deux anneaux externes du proteasome 20 S). Les ARNs cellulaires degrades par les proteasomes sont ceux possedant des sequences ARE (genre AUUUAUUUAUUUAUUUA).  [...]

CNV: Copy Number Variation

On observe également beaucoup ce phénomène sur un seul allèle pour les supresseurs de tumeurs (LOH= Loss Of Heterozygotie). on a un allèle muté et un allèle normal donc toujours production de protéine normale et donc poas de transfo maligne mais par la suite la cellule perd l'allèle normal et ne garde que l'allèle muté.  [...] Le nombre de copies d'un gène va influencer la quantité d'ARNm produite et donc la quantité de protéine finale (ou d'ARN si c'est un transcrit non traduit comme pour les miRNA). C'est une relation qui relie l'efficacité en fonction de la dose... Plus tu as de protéine A et plus tu auras d'activité correspondant à l'activité A dans ta cellule.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéine à activité tyrosine kinase + protéine à actvité théonine/sérine kinase ??

[Biologie Cellulaire] Protéine à activité tyrosine kinase + protéine à actvité théonine/sérine kinase.  [...] insuline/glucagon). RAS est un proto-oncogène (empêche la division incontrôlée des cellules) c'est une GTPase qui influence de nombreux processus cellulaires par l'action de kinase. Une mutation d'un gène ras (changement d'interaction avec les prots kinases) peut permettre la formation de tumeurs.  [...]

[Biologie Cellulaire] apoptose

Je viens de lire un article sur l'apoptose et le role anti-apoptotique d'IEX-1, et la conclusion est à peu près celle ci. IEX-1 va permettre la potentialisation de la voie Erk et va protegé les cellules de l'apoptose. Or le role anti-apoptotique d'IEX-1 est indépendant de cette potentialisation de la voie ErK.  [...] Ma question est donc la suivante savez-vous sur quoi va interagir IEX-1 pour proteger les cellules de l'apoptose Augmentation de l'activité de Bcl-2 Inhibition de l'activité des caspases.  [...]

[Biologie Moléculaire] [biologie moléculaire] Swissprot

je dois travailler avec un fichier provenant de la banque swissprot, cependant je ne comprends pas la nomenclature utilisée. Celle ci est expliquée dans la banque de données mais seulement ern anglais, or mon anglais ne suffit pas pour tout comprendre.   [...] j'aimerais pouvoir avoir la séquence d'acides aminés d'une protéine lequel de ces programmes est ce que j'utilise merci pour votre réponse.  [...]